[发明专利]一种具杀线虫活性的假丝酵母菌及其制备方法与应用

说明书

  

技术领域

本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一种具杀线虫活性的假丝酵母菌及其制备方法与应用。 

背景技术

线虫作为一类重要的病原物，它的危害已成为农林生产上的重要问题。全世界已报道的植物寄生线虫达200多属5000余种。作物病原线虫危害粮食、油料、蔬菜、水果、棉花、大豆、花生、三七、西洋参等3000多种植物，由于其具有地域分布广、宿主种类多样、隐蔽性强、防控困难等特点，已成为农业生产中的第二大病害。据不完全估计植物寄生线虫每年造成全球1570亿美元的损失。松材线虫、根结线虫、胞囊线虫是最严重的危害多种重要作物的线虫。松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。由于其危害严重、防治困难而受到世界各国的高度重视，在世界上被列为重要的危险性森林病害。通常感病后40多天即可造成松树枯死，3~5年即可摧毁成片松树，给人们带来了极大的经济损失。松材线虫的危害引起疫区的恐慌，被称为无烟的森林火灾。根结线虫仅对世界上重要的经济作物每年造成的损失就高达数百亿美元。从世界范围看，根结线虫造成的年收入损失率约为10%。根结线虫病害在我国大部分地区都有发生，导致作物常年减产25%左右，严重时可以达70%以上。花生根结线虫在我国山东胶州半岛发生严重，对产量影响极大，一般减产20~30%，严重的减产70~80%。在我国除东北三省外，内蒙古、河北、北京、山西、安徽、江苏等省市仅大豆胞囊线虫的受害面积就达2 000万亩以上，一般造成产量损失15~20%，严重的地块达50~80%以上，严重病土甚至4~5年不能种植大豆，粗略估计每年造成损失达1亿美元。在河南燕麦胞囊线虫病每年造成了小麦减产15~20%，已严重威胁我国小麦的安全生产。另外，小麦受此线虫侵染后，很容易受到其它病原物的入侵，加重了危害。 

目前，虽然可以通过传统的轮作、土壤改良及化学防治等途径加以控制某些植物的线虫病，但对于一些经济作物和林木而言，轮作防病难以实施，甚至根本不可能进行。近些年来，随着人们环境意识的增强，化学杀线剂的应用逐步受到限制，除了继续探索低毒，低残留，高选择性的化学农药外，人们更关注开发生物防治制剂以作为化学农药的补充或替代品。因此，对线虫的生物防治研究自然成为重点和焦点问题。 

线虫的生物防治是直接利用线虫的生物天敌或者其某些方面的生物特性来进行防治。线虫的天敌多种多样，主要有食线虫真菌、细菌、螨、捕食性线虫等，目前国内外研究的以食线虫真菌为主。但是，由于土壤存在的抑真菌作用等因素的影响，限制了线虫生物防治的发展。同时，在微生物家族中，酵母菌由于其对宿主的低毒性、生长快速、易于培养，一般不产生对人和寄主有害的代谢产物，对多种胁迫条件和逆境具有较强的耐受力，对多数化学杀菌剂不敏感，能与多种化学物质及物理方法结合使用。此外，酵母菌的遗传学基础研究比较清楚，其遗传转化系统比较完善，具有通过基因工程技术提高其生防效力的潜力。因此，研究开发酵母菌杀线虫剂对防治线虫和开发新的生物杀线虫剂具有重要的意义。目前关于假丝酵母菌生物防治线虫的相关技术报道有限，市场上无来源于假丝酵母菌的用于防治线虫的商品生物防治制剂，尚属技术空白。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种具杀线虫活性的假丝酵母菌及其制备方法，开发假丝酵母菌源生物杀线虫剂。 

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种具杀线虫活性的假丝酵母菌，该菌株经分类学鉴定，命名为克鲁丝假丝酵母菌（Candida krusei）TY9，于2014年9月20日保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址是湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编是430072，保藏编号为CCTCC M 2014435，拉丁学名为Candida krusei。 

所述克鲁丝假丝酵母菌TY9系本发明人在开展胞外蛋白酶对线虫侵染机制的研究中，从大量植物根系土壤酵母菌中筛选的假丝酵母菌属。研究发现其对线虫具极高的毒杀活性，通过多批次杀线虫活性试验确定其活性后，对菌株进行形态学、生理生化及分子鉴定，确定为克鲁丝假丝酵母菌（Candida krusei）TY9菌株。 

所述克鲁丝假丝酵母菌TY9菌株的主要形态特征为：在YM平板培养基上菌落呈圆形，饱满，表面湿润光滑，菌苔白色；细胞圆形，椭圆形，芽殖。