[发明专利]检测CX3CR1基因V249I突变位点的方法和引物

说明书

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测CX3CR1基因V249I突变位点的方法和引物。

背景技术

近年来，随着生活方式的逐渐改变，糖尿病发病率正在逐年增高，成为脑血管病的常见危险因素之一。临床资料研究表明，与非糖尿病患者相比，糖尿病性脑梗死患者的病残率、复发率、死亡率较高，并且病情恢复较慢。糖耐量减低(impaired glucose tolerance,IGT)和空腹血糖调节减低(impaired fasting plasma glucose,IFG)，两者是正常葡萄糖稳态和糖尿病高血糖之间的中间代谢状态，且均为2型糖尿病高风险的预示因素。有研究显示IGT患者中已有脑血管意外的风险，在IGT阶段各种复杂的关系已经充分暴露，糖代谢发生异常，胰岛素抵抗，高胰岛素血症，内皮细胞功能紊乱，氧化应激，血脂异常，血压升高等交织在一起，从而出现靶器官的损害。因此脑梗死患者的糖代谢异常是预测其预后的重要因素。

Fractalkine(FKN)是炎症内皮细胞释放的一种趋化因子，与受体CX3CR1结合以后可以增强自然杀伤细胞(NK细胞)的杀伤力，从而损伤血管内皮细胞，促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的形成。因此，观察高血糖尤其是糖调节异常阶段与急性脑梗死患者FKN表达相关性的研究，对急性脑梗死合并糖耐量异常患者的防治工作将会有重要的临床意义。国外已有文献报道空腹血糖(FPG)和糖负荷后2h血糖(2hPG)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的独立危险因素。另外有研究表明，颈动脉粥样硬化是导致脑梗死的重要原因之一。随着对动脉粥样硬化性疾病其相关发病机制的不断深入研究，近年来发现一种由炎症内皮细胞释放的新趋化因子Fractalkine(FKN)，与表达在淋巴细胞、单核细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)上的CX3CR1受体结合以后，可以增强NK细胞的杀伤力，损伤血管内皮细胞，从而促进动脉粥样硬化性疾病的形成和发展。趋化因子家族是一系列分子量约为8-12KD，结构相似并具有趋化功能，能够控制细胞定向迁移的细胞因子。趋化因子肽链N端的半胱氨酸残基是高度保守的，根据其相对位置和数量的差异，可以将趋化因子分为四个亚族。Fractalkine(FKN)是目前发现的唯一的CX3C类趋化因子。FKN基因定位于人类第16号染色体中的q13片段。不同于与其他趋化因子的是，FKN有两种存在形式，即膜结合型FKN和可溶型FKN，其中膜结合型FKN是黏附分子，可溶型FKN是化学诱导物。成熟的膜结合型可分为三段：胞外段，其CX3C趋化因子结构域位于头部氨基端，含有氨基酸残基76个，下面连接一段粘蛋白样的茎状结构，共有氨基酸残基241个，其中含有丰富的苏氨酸(Thr)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)及谷氨酸(Gly)；跨膜段，共含有疏氨基酸残基18个；胞内段，有氨基酸残基37个。膜结合型FKN位于其近膜侧的第314-317位氨基酸残基，即Thr-Arg-Arg-Gln，是一双碱基的水解位点，可以由蛋白酶水解，则膜结合型FKN转变成可溶型FKN。可溶型和膜结合型FKN之间的平衡是金属蛋白酶依赖性蛋白酶通过调节实现的。FKN在人体内分布广泛。研究表明，在非造血组织、神经细胞及血管内皮细胞表面，均发现有FKN表达。另外，Foussat等也发现在上皮细胞FKN表达较高。大多数FKN在活化的内皮细胞表面表达，既具有黏附功能又具有趋化作用，并且参与了白细胞向炎症组织游走的过程。FKN通过其黏蛋白样茎状结构，可以迅速结合位于细胞表面的高亲和受体CX3CR1，从而发挥生物学作用，并且不需要黏附分子参与该过程。另外有实验发现，FKN还可以增加炎性因子渗出，从而促进炎症级联反应的发生。