[发明专利]检测CX3CR1基因V249I突变位点的方法和引物无效

申请号：	201410366629.8	申请日：	2014-07-29
公开（公告）号：	CN104195234A	公开（公告）日：	2014-12-10
发明（设计）人：	王淑一;陈奕磊;林筱剑	申请（专利权）人：	杭州艾迪康医学检验中心有限公司
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12N15/11
代理公司：	浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100	代理人：	徐关寿
地址：	310023 浙江***	国省代码：	浙江;33
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摘要：
搜索关键词：	检测 cx3cr1 基因 v249i 突变方法引物
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【权利要求书】：

1.检测CX3CR1基因V249I突变位点的引物，其特征在于，包括：扩增CX3CR1基因V249I突变位点的正、反向引物；其碱基序列为：

V249I-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA

V249I-R：GTAAAGGTATCTTCTGAACT。

2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物还包括正向测序引物，其碱基序列为：

V249I-S-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA。

3.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用浓度比为：V249I-F : V249I-R=1:1。

4.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正向测序引物V249I-S-F的使用浓度3.2uM。

5.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向扩增引物的扩增反应条件为：第一阶段，95 ℃ 预变性10min；第二阶段，变性温度94 ℃ 30sec，退火温度58 ℃ 90sec，延伸温度72 ℃ 30sec，循环35次，第三阶段，72 ℃ 10min；第四阶段，扩增反应结束，扩增产物在4 ℃下保存。

6.一种检测CX3CR1基因V249I突变位点的方法，其包括如下步骤：

(1)提取样本DNA；

(2)利用一对扩增引物V249I-F和V249I-R对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；

(3)利用正向测序引物V249I-S-F对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩增产物的基因序列；

(4)将(3)中的基因序列与CX3CR1基因野生型参考序列CX3CR1-ref进行比较，确定突变位点是否存在，其特征在于，

V249I-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA

V249I-R：GTAAAGGTATCTTCTGAACT

V249I-S-F：GAGTTATTGCTACTTCAGAA。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)的扩增反应条件为：第一阶段，95 ℃ 预变性10min；第二阶段，变性温度94 ℃ 30sec，退火温度64 ℃ 90sec，延伸温度72 ℃ 30sec，循环35次；第三阶段，72 ℃ 10min；第四阶段，扩增反应结束，扩增产物在4 ℃下保存。

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