[发明专利]一种核酸显色剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于核酸显色剂领域，尤其涉及一种在室温下可长期保存且可肉眼直接判读核酸扩增反应产物的阴性或阳性的核酸显色剂及其应用。

背景技术

花青类染料，如SYBR Green I、SYBR Green II、SYBR Gold、GelStar等可用于DNA、RNA的分析和检测。这类花青类染料单独存在时只能发出微弱的荧光，一旦结合到单链或双链核酸上以后，能够激发出千倍以上的荧光增量。例如，高浓度的SYBR Green I溶液呈现出橙黄色或是橘红色，与核酸产物结合后会变为绿色。花青类染料的这种特性可以用来直接判断核酸扩增反应的结果。但是，花青类染料在液态、常温下是不稳定的，通常需要溶解在有机溶剂中低温储存，不仅耗费电力能源，运输、使用过程也很不方便。尤其在野外核酸扩增反应试验中，由于难以实现低温环境，通常无法应用花青类染料。

而且，花青类染料，例如，SYBR Green I会抑制DNA聚合酶的反应活性，如果在核酸扩增反应前即将花青类染料直接加入PCR管中，则会影响扩增反应进行，且扩增反应中的高温程序使该类花青类染料很容易失去显色稳定性。如果在扩增反应完成后，再开盖加入该类花青类染料，极易造成DNA污染。因此，实现不开盖直接判读核酸扩增反应产物的结果，避免产生DNA气溶胶污染是本领域技术人员需要解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于解决现有的花青类染料难以常温保存的问题，以及解决不开盖直接判读核酸扩增反应产物的结果的问题。

因此，本发明提供了一种核酸显色剂，其特征在于：至少含有花青类染料、花青类染料稳定剂和固定化剂；其中，所述花青类染料稳定剂包括四戊基铵类化合物，所述固定化剂包括高分子聚合物、糖类或两者的混合物；所述花青类染料的含量为被预定量的所述核酸显色剂稀释为100～250X时的量，所述花青类染料稳定剂在所述核酸显色剂中的浓度为10～100mM，所述糖类的浓度16％～55％(w/v)，所述聚合物的浓度为0.05％～3％(w/v)。

在上述技术方案中，花青类染料稳定剂四戊基铵类化合物混合能够增加花青类染料在高温下的耐受性，使得所述核酸显色剂在室温下能够长期保存。以SYBR Green I为例，在没有添加四戊基铵类化合物的情况下，在常温状态下，最多可保存1～2个星期，就会出现检测灵敏度下降。在添加了四戊基铵类化合物的状态下，SYBR Green I能够在常温甚至高于常温的条件下长期储存，其稳定储存期达到6个月以上。

在上述技术方案中，固定化剂，例如，糖类和高分子聚合物能够增加核酸显色剂的粘度。当将该核酸显色剂进行真空干燥处理，蒸发掉多余的水分后，可将该核酸显色剂由液态变为粘稠的半固态，使得该核酸显色剂能够粘附在PCR反应管盖中央，因此，在进行核酸扩增反应过程中，该核酸显色剂不会因受热融化而滴落到正在进行扩增反应的PCR管中，从而抑制DNA聚合酶的活性，影响扩增反应进行。在空间上，PCR反应管上方为核酸显色剂，下方为反应体系，反应结束后，只需要上下颠倒，使反应产物与核酸显色剂混合就可肉眼直接判读反应结果。无需开盖操作，因此避免了DNA气溶胶污染，使反应结果更准确可靠。由于具有固定化剂，一般运输、储存、操作过程中的碰撞、震动均不会导致该核酸显色剂从PCR管盖中溅出、滴落等。而且，在花青类染料稳定剂和固定化剂存在的条件下，真空干燥处理后的核酸显色剂具有更加稳定的显色特征，在反应过程中不会因为经受高温而丢失显色特征。