[发明专利]磷脂酶A2水解反应试剂

说明书

技术领域

本发明属于心血管疾病的临床诊断试剂技术邻域，具体来说，涉及一种磷脂酶A₂水解反应促进剂、底物稳定剂以及用于体外检测磷脂酶A₂水解反应的试剂，以及利用该试剂检测磷脂酶A₂的检测方法。

背景技术

心血管疾病是人类最常见的疾病，严重危害着人类的生命和健康。动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是心血管疾病的病理生理基础。流行病学调查显示，在西方发达国家，AS是发病率和死亡率最高的疾病，在我国其发病率及死亡率也呈逐年上升趋势。AS是一种慢性炎症性疾病，是血管内皮功能失常和炎症反应相互作用引起的一个动态性病变过程，该进程的急剧变化可导致血管内皮损伤、斑块破裂、血栓形成，越来越多的证据表明局部和全身炎症在AS的发生、发展中起着重要作用。AS可引发许多严重后果，如冠状AS可导致冠状动脉狭窄，引起心肌缺血，发生急性心肌梗死，甚至猝死；脑AS则引起脑缺血、眩晕、头痛和昏厥等症状，亦可促进脑动脉血栓形成或破裂出血，诱发中风等。因此，早期发现和防治AS是目前医学领域急需解决的一个重要研究课题。

AS是多种危险因子共同作用的结果。Meta分析数据表明，炎症标志物可用于预测心血管疾病事件。过去几年中，人们已提出了一系列经典或新型仍在研究中的炎症标志物，以评价炎症对AS形成的作用。迄今发现了许多与心血管病有关的炎症标志物，如白细胞介素-6和C反应蛋白等。而Lp-PLA₂作为一种新兴的炎症标志物，在血管炎症中有关键作用且对AS发展有重要影响，目前愈加受到关注(The Lp-PLA₂Studies Collaboration,Lipoprotein-associated phospholipase A₂and risk of coronary disease,stroke,and mortality:collaborative analysis of32prospective studies,Lancet,2010,375:1536-1544)。

Lp-PLA₂(PAF-AH)是磷脂酶A₂超家族中的一员，Lp-PLA₂是丝氨酸依赖的磷脂酶A，其催化活性不依赖钙离子，属于PLA2G7，含有441个氨基酸残基，相对分子质量约为45,400。人血清Lp-PLA₂由巨噬细胞、淋巴细胞以及肥大细胞合成与分泌，在AS部位大量存在，并可被炎症介质调节。Lp-PLA₂可水解血管内膜的氧化卵磷脂，生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸，后二者是促炎介质，能刺激产生粘附分子和细胞因子，促进单核细胞向血管内膜聚集。单核细胞在内膜聚集衍生为巨噬细胞，吞噬氧化型低密度脂蛋白变成泡沫细胞，最终聚集成AS斑块，释放细胞因子和蛋白酶，降解纤维帽的平滑肌细胞和胶原基质，使斑块变得脆弱、破裂，导致血栓形成和心血管事件的发生。因此，Lp-PLA₂具有促AS形成的作用，且Lp-PLA₂活性与其浓度呈正相关；此外，Lp-PLA₂不依赖于其他风险预测因子，可作为冠心病新的危险因子，能独立预测心血管事件，对传统危险因素不能鉴别出的风险人群更具有预测价值。

作为目前唯一的与血管内壁炎症密切相关的生物标志物，Lp-PLA₂的水平反映了患者血管内壁炎症的状态，为临床判断AS斑块的稳定性提供了直接的实验室指标，成为心脑血管事件中高危患者早期识别和筛查的特异性指标。因此，自2010年后，Lp-PLA₂被写入国外4个国家或/和地区级的临床指南，成为临床的常规检测指标。针对Lp-PLA₂的测定方法，目前国内外主要采用高效液相色谱法或酶联免疫吸附法检测Lp-PLA₂的蛋白量(WO2005/074604、EP2280282、US2007/0281323、CN103619831、CN103033629)，对其活性无能为力。