[发明专利]LPNISKP修饰的吲哚喹嗪，其制备，纳米结构，活性和应用

说明书

技术领域

本发明涉及(6S)-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro。涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它的体内外抗肿瘤作用，涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。因而本发明涉及它在制备抗肿瘤药物，制备抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

技术背景

恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，恶性肿瘤并发的炎症、血栓和转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90％以上的恶性肿瘤患者都是死于肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素：1)肿瘤细胞表面形成微血栓，逃避巨噬细胞吞噬，通过血液循环迁移到远端；2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁；3)细胞粘附到血管壁的肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织。

由于现有抗肿瘤药物不具备抗转移作用，所以疗效不理想。发明同时具有抗肿瘤、抗炎症、抗血栓和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。

RGD四肽，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素α_Vβ₃的阻断剂，具有抗血栓和抗细胞粘附活性。Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro则具备抗肿瘤细胞迁移作用。申请人曾经把RGD四肽与雌激素偶联，制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把RGD四肽与四氢-β-咔啉-3-羧酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉-3-羧酸及1-位取代的β-咔啉-3-羧酸，包括1-位取代的四氢-β-咔啉-3-羧酸或1-位取代的β-咔啉-3-羧酸制备高效的抗血栓剂或抗肿瘤剂。下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力，筛选了数百种化合物，一直没有得到同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用的化合物。

发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上，认识到将Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro与(6S)-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-羧酸偶联，形成的化合物会同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用。基于这个认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下面结构的(6S)-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro。

本发明的第二个内容是提供(6S)-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的制备方法，该方法包括：

(1)在多聚磷酸的存在下，L-色氨酸和苯甲醇反应，生成L-色氨酸苄酯；

(2)在三氟乙酸的存在下，在二氯甲烷中1，1，3，3-四甲氧基丙烷和L-色氨酸苄酯缩合为(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-2，3，4，9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；

(3)在三乙胺的存在下，在丙酮中双乙烯酮和(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-2，3，4，9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯缩合为(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-2-乙酰乙酰基-2，3，4，9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；

(4)在盐酸水溶液(2M)的存在下，在丙酮中(3S)-1-(2，2-二甲氧乙基)-2-乙酰乙酰基-2，3，4，9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯氧化环合为(6S)-苯基-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-羧酸酯；

(5)冰浴下在NaOH的水溶液(2M)和甲醇中，(6S)-苯基-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-羧酸酯转化为(6S)-3-乙酰基-4-氧代-4，6，7，12-四氢吲哚[2，3-a]喹嗪-6-羧酸；

(6)采用逐步缩合法，在N，N-二环己基碳二亚胺和N-羟基苯骈三氮唑的存在下，在干燥四氢呋喃中反应，得到全保护多肽序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl；

(7)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)中，全保护多肽序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl脱除Boc得Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl；