[发明专利]一种稻米淀粉不同组分分离及含量测定的方法

说明书

技术领域

本发明属于稻米品质测定方法技术领域，具体涉及一种用于稻米聚合度不同的淀粉各组分的分离及其含量测定的方法。

背景技术

按稻米的口感质地，水稻品种可基本分为四大类：普通籼稻品种、普通粳稻品种、软米品种、糯稻品种，这四类型水稻品种的米饭在口感质地上存在很大差异。为了提高水稻品种的品质，满足人们对稻米口感质地的不同需求，育种工作者需对影响稻米口感质地的因素进行研究。人们早已发现, 相似直链淀粉含量的品种之间在米饭质地上存在较大差异，日本学者与国际水稻所合作也发现支链淀粉长链在决定米饭质地中的重要作用。现在已明确, 造成米饭质地差异的真正原因不是淀粉含量（amylose content, AC）, 而是支链淀粉上长链的多少和链的长度（聚合度）大小。

1958年, Williams 等发现 “碘染值”与淀粉含量（amylose content, AC） 之间存在相关性, 提出了用比色法测定稻米直链淀粉测定方法。后来，经过改进的该方法成为国际通用标准。但是, 这种由“碘染值”推算的所谓“AC”与稻米真正具有的AC 之间存在一定的差异。因为部分长链的支链淀粉同样可以与碘发生反应。所以，Takeda 等于1987 年将用碘比色法测得的AC值称为表观直链淀粉含量。从组成看, 表观直链淀粉实际上包括两部分组成, 即真正的直链淀粉和部分支链淀粉的长链。也就是说，真正的直链淀粉和部分支链淀粉的长链均能与碘试剂（显色剂）反应而显色，凡是能与碘试剂（显色剂）结合的淀粉均能直观地观察到颜色，因而，可通过分光光度计测定其显色的溶液的吸光度，就称为表观直链淀粉。

无论直链淀粉还是支链淀粉都是由多个葡萄糖分子经羟基失水聚合而成的葡萄糖苷。稻米淀粉是由聚合度不同的葡萄糖苷链组成的，含有大量羟基。由于淀粉中羟基以氢键状态存在，分子间有巨大聚集力，阻止水分子对淀粉颗粒的渗透及溶剂化作用；同时，还存在不同分支程度直链淀粉和支链淀粉，缠绕纠结在一起，致使稻米淀粉几乎不溶于水。因此，为了改善淀粉溶解性能，必须破坏氢键造成的凝沉现象。

破坏淀粉葡萄糖链间氢键的常用方法包括对淀粉液体高温加热，加入氢氧化钠或氢氧化钾等试剂。

现有技术测定大米淀粉含量的方法主要步骤是将大米磨成粉末，加入一定浓度的稀碱液溶解后检测显色部分的吸光度值，只能计算出表观直链淀粉的部分含量。此种方法不能显示出淀粉中聚合度和淀粉分支程度不同的不同组分中表观直链淀粉的含量，因而不能更好地反映影响口感的表观直链淀粉含量情况。现有技术的缺陷和不足不能满足对稻米淀粉不同组分含量测定的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在只能笼统的计算出表观直链淀粉的部分含量，不能反映聚合度不同的不同组分的表观直链淀粉的含量及其分布情况，以致不能更好地反映不同口感质地的水稻品种的淀粉组分，影响水稻提高口感品质的育种材料的筛选。

本发明的目的是通过直接对影响口感品质的稻米中聚合度不同的不同组分中表观直链淀粉的含量进行测定，为改善水稻口感品质的育种材料筛选工作提供依据。因此本发明提供一种稻米淀粉不同组分分离及含量测定的方法。

本发明方法是将缠绕混杂在一起的不同聚合度和分支程度的淀粉分离开，以便分离测定淀粉中聚合度不同的不同组分的表观直链淀粉的含量。 

本发明所提供的一种稻米淀粉不同组分分离及含量测定的方法的技术方案包括以下步骤：

（1）随机取10粒以上去除颖壳、种皮和胚的完整米粒，每个米粒均按如下方法操作：

A.称重一粒米粒后加入10ml纯净水在80℃水浴中糊化1小时，冷却至室温即得淀粉悬浊液；

B.将淀粉悬浊液按离心条件离心分离得到上清液和沉淀，上清液为待测样，标记0；向该沉淀中加入1.5mg/ml KOH溶液10ml,摇匀后留作下一次离心分离；所述的离心条件为：相对离心力20000g，4℃离心30min；

C.将步骤（1）B中加入了KOH溶液的沉淀离心分离，离心条件为：相对离心力20000g，4℃离心30min，得到上清液和沉淀，将所得的上清液作为待测样，按顺序标记为1，将所得的沉淀再加入KOH溶液再离心分离，如此重复离心分离操作，直至所得沉淀不能溶解为止，每次离心的条件均为：相对离心力20000g，4℃离心30min；每次对所得沉淀加入的KOH溶液均为10ml，但加入的KOH溶液的浓度以1.5mg/ml梯度递增，各次离心分离所得的上清液均为待测样并按顺序标记，即获得一系列待测样；