[发明专利]编码具有D‑丝氨酸合成活性的酶的DNA、该酶的制备方法及D‑丝氨酸制备方法

权利要求书

1.一种编码下述(a)的蛋白质的DNA，

(a)蛋白质，由序列号8记载的氨基酸序列构成。

2.一种重组DNA，是将权利要求1所述的DNA整合到载体中形成的重组DNA。

3.一种转化体，是使用权利要求2所述的重组DNA转化宿主细胞得到的转化体。

4.如权利要求3所述的转化体，其中，被转化的宿主细胞为微生物。

5.如权利要求4所述的转化体，其中，被转化的微生物为D-丝氨酸脱氨酶缺失的微生物。

6.下述(a)的蛋白质，

(a)蛋白质，由序列号8记载的氨基酸序列构成。

7.一种制备具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的活性的酶的方法，其特征在于，培养权利要求3～5中任一项所述的转化体，从所得的培养物中，获取具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的酶活性的蛋白质。

8.一种D-丝氨酸的制备方法，其中包含在权利要求3～5中任一项所述的转化体或下述处理物的存在下使甘氨酸和甲醛反应，

所述处理物选自对所述转化体进行机械破坏、超声波处理、冻结融解处理、干燥处理、加压或减压处理、渗透压处理、自身消化、表面活性剂处理、酶处理而得到的物质、及含有通过上述处理所得的、具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的活性的酶的部分的固定化物、及所述转化体的固定化物。

9.一种D-丝氨酸的制备方法，其中包含在权利要求6所述的蛋白质的存在下使甘氨酸和甲醛反应。

10.如权利要求8所述的制备方法，所述制备方法在权利要求5所述的转化体或下述处理物的存在下使甘氨酸和甲醛反应合成丝氨酸，

所述处理物选自对所述转化体进行机械破坏、超声波处理、冻结融解处理、干燥处理、加压或减压处理、渗透压处理、自身消化、表面活性剂处理、酶处理而得到的物质、及含有通过上述处理所得的、具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的活性的酶的部分的固定化物、及所述转化体的固定化物，

所述制备方法采用下述(1)～(4)中一种以上的方法，将在所述反应的反应液中副生的L-丝氨酸抑制在相对于D-丝氨酸为1.5摩尔％以下，

(1)对具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的活性的微生物进行有机溶剂处理及/或加热处理的方法，

(2)将反应液中的甲醛浓度，在a)通过所述(1)的方法进行有机溶剂处理及/或加热处理时，控制在2M以下；在b)未进行有机溶剂处理及/或加热处理时，控制在150mM以上2M以下的方法，

(3)使用含有具有由甘氨酸和甲醛合成D-丝氨酸的活性的酶、且L-丝氨酸合成酶基因缺失的微生物作为催化剂的方法，

(4)向反应液中添加含有具有L-丝氨酸脱氨酶活性的酶的微生物的方法。

11.如权利要求10所述的制备方法，其中，有机溶剂为选自甲醛、苯甲醛、二氯乙烷及异丙醇中的一种以上的有机溶剂。

12.如权利要求10所述的制备方法，其中，有机溶剂处理及/或加热处理在2价金属离子存在下进行。

13.如权利要求12所述的制备方法，其中，2价金属为选自镁、锰、锌、镍、钴及铁中的一种以上的金属。