[发明专利]一种氧化葡萄糖酸杆菌梯度强度启动子

权利要求书

1.一种来源于氧化葡萄糖酸杆菌的强启动子，其特征在于，是核苷酸序列如SEQ ID NO.1的P_tuf-WSH003、SEQ ID NO.3所示的P_sldh、SEQ ID NO.4所示的P_psldh、SEQ ID NO.5所示的P_sod或SEQ ID NO.6所示的P_aldh。

2.一种来源于氧化葡萄糖酸杆菌的梯度强度启动子，其特征在于，由P_tuf-WSH003、P_tuf-621H、P_sldh、P_psldh、P_sod、P_aldh中两种或两种以上强度不同的启动子构成；所述启动子P_tuf-WSH003、P_tuf-621H、P_sldh、P_psldh、P_sod、P_aldh的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求2所述的梯度强度启动子，其特征在于，由所述6种启动子构成，启动子强度梯度是P_tuf-WSH003>P_tuf-621H>P_sldh≈P_psldh≈P_sod>P_aldh。

4.一种筛选梯度启动子和强启动子的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)根据氧化葡萄糖酸杆菌的基因组序列，挑选中央代谢途径酶基因与上一个基因的ORF之间的所有核苷酸片段；

(2)采用启动子在线评测软件，筛选潜在的启动子序列；

(3)将获得的潜在的启动子序列，通过融合PCR与EGFP进行连接，然后连接到广宿主型载体pBBR1MCS2，构建成重组载pBBR1MCS2-promoter-egfp；

(4)将重组载体通过三亲本杂交的方法导入G.oxydans细胞，利用荧光显微镜和荧光酶标仪进行定性和定量检测，获得不同强度的启动子。

5.权利要求1-3任一所述的强启动子在氧化葡萄糖酸杆菌基因或代谢工程改造中的应用。

6.携带权利要求1所述启动子的载体或基因工程菌。