[发明专利]一种韭菜籽抗菌三肽及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种韭菜籽抗菌三肽及其制备方法与应用，属于食品及生物医学领域。

背景技术

我国是一个农业大国，农作物的种类繁多，但由于受加工技术条件的所限，农作物的加工大都处于初级阶段，其加工后的残余物中仍有较大含量的蛋白质，而它们大多主要用于饲料工业或自然排放，不仅浪费了资源，同时也造成环境污染。植物活性肽概念的提出及分离检测技术的提高，使人们开始逐渐重视对富含蛋白质的农副产品的深加工并从中获得多种活性肽，如酪蛋白磷酸肽、降血压肽和易消化吸收肽等，植物来源活性肽的研究和开发对提高我国农产品深加工的附加值具有重要作用。

抗菌肽作为大多数生物自然防御系统的重要组成部分，对生物体抵御病原菌的入侵具有重要意义。抗菌肽是由多细胞生物免疫系统产生的一种小分子肽，具有分子量小，两亲性和良好的热稳定性等特点。抗菌肽具有广谱的抑菌作用，自20世纪80年代初天蚕素和防御素纯化鉴定以来，天然抗菌肽的研究引起人们的极大兴趣。植物对微生物的防御一直是植物病理学研究的热点，病菌危害是世界范围内农作物减产的重要原因。植物的生长时时都可遭受微生物的侵袭，目前研究表明，它虽然没有哺乳动物那样特异的免疫系统，但非特异的天然免疫体系却十分惊人：不同类型的具抗菌作用的物质(如过氧化氢酶裂解酶)、次生代谢物质以及抗菌蛋白和抗菌肽等在植物中广泛存在，对植物抗菌肽的研究近年来十分活跃，在许多研究领域都显示出越来越重要的理论和应用价值。

韭菜籽为我国常见食用蔬菜百合科植物韭菜Allium tuberosum Rottl干燥成熟的种子，韭菜籽（药典中常称为韭子）为我国传统中药品种，始载于《名医别录》， 列为中品。据药典记载，韭菜籽具有温补肝肾、壮阳固精之功效。韭菜籽作为壮阳补肾用入药在我国民间已有数千年的历史。2002年我国卫生部将其列为药食两用植物天然产物。韭菜籽这种植物种子资源在我国十分丰富，产量居世界首位。目前国内外一直以来对韭菜尤其是其种子韭菜籽的研究很少。国外还未对韭菜籽进行过化学成分和功效等方面的研究，国内化学成分方面的研究也并不多，迄今为止, 对其活性多肽或药理研究国内外都还几乎没有报道。因此，有必要充分利用我国十分丰富的韭菜（韭菜籽）植物资源，对其进行深入系统研究，为实现韭菜籽中药现代化和开发高效、安全的健康食品和药品提供科学依据。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种韭菜籽抗菌三肽，及其制备方法和在食品和生物制药领域中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了一种韭菜籽抗菌三肽，其氨基酸序列为Ser-Ala-Asn。该多肽能够抑制常见细菌生长，包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

所述的韭菜籽抗菌三肽的制备方法，从天然韭菜籽中分离纯化或人工合成方法得到。

从天然韭菜籽中分离纯化的具体步骤包括如下：

1）韭菜籽粗提物的制备：韭菜籽经粉碎，按质量体积比1：10加入体积分数为10%醋酸溶液，超声波辅助提取20 min，再在室温下搅拌提取8 h后，12000 rpm离心10 min，取上清液，冷冻干燥，即为韭菜籽粗提物。

2）分离纯化：取韭菜籽粗提物利用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，以去离子水为洗脱液，流速0.3 mL/min，测量洗脱组分214 nm波长处的吸光值，收集具有最佳抗菌活性的峰b，利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离，RP-HPLC的洗脱梯度为0~5 min，体积分数为5%乙腈；5~40 min，体积分数为5%~30%乙腈梯度洗脱；40-50 min，体积分数为30%乙腈；流速为2.0 mL/min，检测波长214 nm，收集保留时间20.5~21.5min的洗脱峰，冷冻干燥即得所述韭菜籽抗菌三肽。

本发明还提供了所述的韭菜籽抗菌三肽在制备天然食品防腐剂、杀菌剂或杀菌药物中的应用。

本发明的优点在于：

所述抗菌三肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有显著的抑制作用，且溶血活性较小，表明其在食品防腐剂和药物的开发应用方面有重要价值。

附图说明

图1：韭菜籽提取物Sephedex G-50凝胶过滤色谱图。

图2：Sephedex G-50凝胶过滤色谱组分抗菌活性。

图3：凝胶色谱洗脱峰b的反相高效液相色谱图。

图4：反相高效液相色谱分离组分的抗菌活性。

图5：韭菜籽抗菌三肽的纯度鉴定图。

图6：韭菜籽抗菌三肽的质谱图。