[发明专利]一种功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法及其抗炎活性应用

说明书

技术领域

本发明涉及肽聚糖的制备方法，尤其是涉及一种功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法及其抗炎活性应用。 

背景技术

乳酸菌作为一类重要的定植型肠道益生菌，被广泛的应用于发酵食品加工中，尤其是酸乳，干酪，泡菜等。肠内乳酸菌与宿主健康的密切关系，越来越多的被国内外微生物学家阐述，尤其在诱导有关免疫调控因子的释放来刺激免疫系统发挥其抗感染、抗肿瘤等生物效应方面。在乳酸菌对宿主的免疫调节活性方面，最近研究发现某些活菌和死菌间并没有显著差异，推测发挥其免疫调节作用的原因之一可能是其细胞壁中的肽聚糖（PGN）、磷壁酸（LTA）及表层蛋白等物质。益生菌肽聚糖，由于其在免疫调节中所发挥作用的探究相对缺乏，正潜移默化的被越来越多的研究者们所关注。 

嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）作为一种重要的肠道益生菌，其细胞壁肽聚糖作为一种免疫增强剂，通过调节肠道免疫系统，可增强机体非特异性免疫功能，对机体健康具有重要作用。然而，嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法及抗炎活性研究未见相关报道，市场上也为出现以嗜酸乳杆菌肽聚糖相关的功能食品。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对LPS引起的炎症反应具有较好的抑炎调节功能的功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法及其抗炎活性应用。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法，具体包括以下步骤：将海洋源的嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）保藏号为CGMCC No.8920，按体积百分比2.0-4.0%的接种量，接种在MRS培养基上，于37℃下，厌氧培养18-24h后，于4000-8000g离心15-20min，除去菌体发酵液，然后将沉淀菌体中加入质量分数为4%的SDS溶液，100℃下高温裂解30min，除去蛋白成分；取沉淀物，在沉淀物中加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液，除去磷壁酸；取沉淀物，将沉淀物于4℃过夜透析脱盐后，将沉淀物于-80℃预冻6h后，迅速放入真空冷冻干燥设备中于80-120Pa干燥处理24h，得到的粉末即为嗜酸乳杆菌肽聚糖。 

所述的沉淀菌体与所述的SDS溶液的比例为1g：100ml，所述的沉淀菌体与所述的三氯乙酸溶液的比例为1g：100ml。 

上述功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的抗炎活性应用，该功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖对大肠杆菌脂多糖（LPS）引起的炎症反应具有较好的抑炎调节功能，即嗜酸乳杆菌肽聚糖对iNOS及COX-2蛋白表达具有抑制作用，在Raw264.7巨噬细胞模型上有效抑炎浓度为100-200μg/mL。 

该功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖经免疫切片发现，该功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖有效的降低了iNOS在小肠肠壁细胞的表达量，在小鼠模型上的有效抑炎剂量为100mg/kg/d。 

与现有技术相比，本发明的优点在于： 

本发明一种功能性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法及其抗炎活性应用，首次证明该嗜酸乳杆菌肽聚糖存在着降低大肠杆菌脂多糖引起的炎症反应，为乳酸菌调节肠道免疫活性，调控相关免疫因子的释放来刺激免疫系统发挥其抗感染，开发乳酸菌新型保健因子、功能性食品或药品提供理论依据。

嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），菌株为WZ-D1，保藏号为CGMCC No.8920，于2014年03月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

附图说明

图1为实施例1中嗜酸乳杆菌菌体扫描电镜图； 

图2为实施例1中制备的嗜酸乳杆菌肽聚糖扫描电镜图；

图3为实施例1中嗜酸乳杆菌肽聚糖的HPLC分析图谱； 

图4为实施例2中嗜酸乳杆菌肽聚糖红外扫描光谱图；

图5为实施例3中嗜酸乳杆菌肽聚糖对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子的抑制作用的试验对比图；

图6为实施例3 ICR小鼠实验中不同处理组中的肠细胞中iNOS的表达量差异的试验对比图；从左到右依次为正常对照组、致病性大肠杆菌感染组、肽聚糖治疗组。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。 

具体实施例1 

嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备