[发明专利]一种酮还原酶突变体及其制备和应用有效
| 申请号： | 201410097433.3 | 申请日： | 2014-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN104928265B | 公开（公告）日： | 2018-01-02 |
| 发明（设计）人： | 陈峻青;石利平;尹晓龙;王清 | 申请（专利权）人： | 江苏阿尔法药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P17/12;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司32218 | 代理人： | 傅婷婷,徐冬涛 |
| 地址： | 223800 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 还原酶 突变体 及其 制备 应用 | ||
1.一种酮还原酶突变体基因，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示。
2.权利要求1所述的基因编码的酮还原酶突变体，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.含有权利要求1所述的酮还原酶突变体基因的重组表达载体。
4.一种生产权利要求2所述的酮还原酶突变体的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌中包含权利要求1所述的酮还原酶突变体基因。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的宿主细胞选自大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21(DE3)、酿酒酵母或巴斯德毕赤酵母中的一种。
6.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的载体系统为pUC19或者pSE380。
7.一种酮还原酶突变体多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：培养权利要求4~6中任一项所述的基因工程菌，获得酮还原酶突变体多肽。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于在一定生产罐发酵条件下，对权利要求4~6中任一项所述的基因工程菌进行工业化发酵制备所述的酮还原酶突变体多肽。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述生产罐发酵条件是：DO 30%以上，空气流量1:1.5 vvm，葡萄糖残余量1% 以下。
10.权利要求2所述的酮还原酶突变体作为催化剂在不对称还原2-[3-[3-(2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-氧代丙基]苯甲酸甲酯中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的应用按下述方法进行：在pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，在NAD+、甲酸脱氢酶、甲酸存在下，在权利要求2所述的酮还原酶突变体作用下，不对称还原2-[3-[3-(2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-氧代丙基]苯甲酸甲酯，制得光学手性醇。
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