[发明专利]一种单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法

权利要求书

1.一种单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，将DNA文库单克隆展示于微球表面，实现分子识别可视化监测；所述方法包括如下步骤：（1）将氨基修饰的正向引物通过NHS-氨基反应偶联到NHS修饰的微球表面；（2）将寡核苷酸文库通过液滴单分子微乳PCR以单克隆的形式扩增到偶联有正向引物的微球表面，每个微球上仅展示一种核酸序列；（3）通过单克隆微球库与靶标相关作用，可视化地考察表面展示序列与靶标的结合程度；（4）直接挑选获得能和靶标分子结合的单克隆微球，获取微球上的DNA序列，获得高质量核酸适体。

2.如权利要求1和权利要求2所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：步骤（2）中，利用振荡、搅拌或微流控芯片方式生成含有微球的油包水液滴，每个液滴中至多包含一条寡核苷酸模板。

3.如权利要求2所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：步骤（2）中，采用振荡方式生成含有微球的油包水液滴，其以筛选所需的寡核苷酸文库为PCR扩增模板，加入偶联有正向引物的微球和PCR所需试剂作为水相，油相的组成为40%(w/w)道康宁5225C，30%(w/w)道康宁749，30%(w/w)硅油Ar20。

4.如权利要求1所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：步骤（2）中将这些连有核酸的微球破乳、回收，并对双链DNA进行变性单链化，最终获得用于筛选的核酸展示单克隆微球。

5.如权利要求1所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：靶标为细胞、蛋白质或小分子，如靶标为小分子或蛋白质时，将靶标偶联于固相载体表面便于观察和分离。

6.如权利要求1所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：步骤（4）中核酸展示单克隆微球与靶标孵育，去除不结合的微球，在显微镜下挑出结合的微球。

7.如权利要求1所述单克隆表面展示核酸适体快速筛选方法，其特征在于：步骤（4）中挑选出来的结合微球在试管内进行PCR扩增，获得高亲和性的核酸适体，直接进行测序，获得序列信息。