[发明专利]直接核酸扩增试剂盒、试剂和方法

权利要求书

1. 一种用于核酸扩增的干燥试剂组合物，其包含掩蔽试剂、聚合酶和脱氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)。

2. 权利要求1的干燥试剂组合物，其中所述掩蔽剂是环糊精。

3. 权利要求2的干燥试剂组合物，其中所述环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、6-O-α-D-麦芽糖基-β环糊精、羟基乙基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精和2-羟基丙基-β-环糊精及其衍生物。

4. 权利要求2或3的干燥试剂组合物，其中环糊精是α-环糊精。

5. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其另外包含至少一种引物。

6. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其另外包含赋形剂混合物。

7. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其中赋形剂混合物包含10X PCR缓冲液、Ficoll 70、Ficoll 400、松三糖和无核酸酶水。

8. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其另外包含交换缓冲液。

9. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其另外包含牛血清白蛋白(BSA)。

10. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其中所述聚合酶是OmniKlen Taq (OKT)。

11. 任一项前述权利要求的干燥试剂组合物，其包含α-环糊精、至少一种引物、聚合酶、dNTP、BSA、赋形剂混合物和交换缓冲液。

12. 一种制备用于核酸扩增的干燥试剂组合物的方法，其包括以下步骤：

i) 使聚合酶与掩蔽试剂和dNTP混合，以提供其混合物，和

ii) 干燥所述混合物以形成干燥的试剂组合物。

13. 权利要求12的方法，其中步骤i)的混合物另外包含至少一种引物。

14. 权利要求12和13的方法，其中步骤i)的混合物另外包含赋形剂混合物。

15. 权利要求12-14的任一项的方法，其中步骤i)的混合物另外包含交换缓冲液。

16. 权利要求12-15的任一项的方法，其中所述干燥步骤通过冻干实现。

17. 权利要求12-16的任一项的方法，其另外包括在所述干燥步骤之前冷冻所述组合物。

18. 一种扩增核酸的方法，其包括以下步骤：

i) 用权利要求1-11的任一项的干燥试剂组合物孵育含有核酸的溶液，和

ii) 扩增所述核酸。

19. 权利要求18的核酸扩增方法，其中扩增方法是聚合酶链反应。

20. 权利要求18的核酸扩增方法，其中扩增方法包括逆转录聚合酶链反应或等温扩增。

21. 权利要求18-20的任一项的方法，其另外包括在步骤i)之前的步骤，其中所述溶液通过加入水至核酸中形成。

22. 权利要求18-21的任一项的方法，其中核酸被固定在固体支持体上。

23. 权利要求22的方法，其中固体支持体是基于纤维素的基质。

24. 权利要求23的方法，其中所述固体支持体呈现预冲孔盘的形式。

25. 权利要求23的方法，其中固体支持体呈现FTA预冲孔盘的形式。

26. 权利要求22-25的任一项的方法，其中溶胞试剂被包埋在所述固体基质上。

27. 权利要求18-26的任一项的方法，其中扩增在单一反应容器中进行。

28. 一种使用检测系统检测和/或定量扩增核酸的方法，其包括以下步骤：

i) 使用权利要求18-27的任一项的方法扩增核酸，以产生扩增的核酸，

ii) 检测所述扩增的核酸，和

iii) 任选地定量所扩增的核酸。

29. 权利要求28的方法，其中所述检测系统是PCR成像系统。

30. 一种用于扩增核酸的试剂盒，其包括权利要求1-11的任一项的干燥试剂及其使用说明书。