[发明专利]AGSE缺陷菌株

说明书

本发明涉及突变微生物宿主细胞，如果与未被修饰的亲本微生物宿主细胞相比并且在相同条件下测量，所述突变微生物宿主细胞在AgsE蛋白质产生或其同源物产生上缺陷。已意外地发现，如果与使用未被修饰的亲本宿主细胞的方法相比，在相同条件下测量时，根据本发明所述的突变微生物宿主细胞用于生成目标化合物例如酶的方法中时获得产率提高的所述化合物。

技术领域

本发明涉及优选在其基因组中被修饰以导致多肽生成缺陷的突变微生物宿主细胞，涉及生成所述突变微生物宿主细胞的方法和使用所述突变微生物宿主细胞生成目标化合物的方法。

背景技术

不同的宿主细胞类型可用于不同的工业用途。例如：哺乳动物细胞系用于抗体生产；真菌细胞是用于生产多肽和次级代谢产物的优选生物；细菌细胞优选用于小代谢产物和抗生素生产；而植物细胞优选用于口感和风味化合物。

重组技术广泛用于优化这种宿主细胞的生产率和/或使用这种宿主细胞的工艺。这可涉及许多选择。

一些技术将针对编码目标化合物的目标基因在宿主细胞中的过表达。可按几种方式调节基因表达。

例如可将目标基因置于宿主细胞中，受适合所述细胞的强启动子的表达控制。后者可通过质粒或载体介导的转化将表达盒引入宿主细胞中进行。然后可通过在表达盒中所含启动子正常作用所必需的诱导条件下，培养转化的宿主细胞实现目标化合物的生成。例如，US57228547描述了DNA构建体用于转化曲霉菌(Aspergillus)以在其中获得多肽表达的用途，其中DNA构建体包含用于在曲霉菌中促进转录并且与编码所述多肽的DNA可操作地连接的诱导型启动子DNA。

已知转录激活子是促进RNA聚合酶与控制目标基因表达的启动子结合的调节蛋白。可以通过例如以下来调节基因表达：使用生成更高量的特异性转录激活子的突变宿主细胞，导致在受所述转录激活子激活的启动子控制下的目标基因表达增加。在例如WO2006/040312中描述了这种方法，提到了PrtT转录激活子及其用途。

在另一替代性方法中，可通过增加用于表达基因的宿主细胞中目标基因的拷贝数来提高基因表达。然而，宿主细胞中存在的基因拷贝数是限制因素，因为包含大量待表达基因拷贝的重组宿主细胞可能变得不稳定。在WO9846772中给出了这个问题的解决方案，其描述了包含多个基本同源的DNA结构域的稳定丝状真菌，其中在所述结构域的至少2个中，存在编码目标化合物的重组DNA分子的整合的拷贝。

还有其他旨在提高宿主细胞对目标化合物的生产率的方法可涉及缺失或灭活竞争途径、改变酶的区室化(compartmentalization)、增加蛋白质或代谢产物分泌、增加细胞器含量(organelle content)等。

尽管在对宿主细胞中目标化合物的表达的理解上有进展，但是仍然需要在商业或工业规模上，增加重要目标化合物的生成的方法。令人惊讶的是，我们已经发现下调微生物宿主细胞、例如表达目标化合物(例如目标酶)的丝状真菌宿主细胞中的agsE基因导致所述宿主细胞对所述酶的生成增加。

发明概述

本发明涉及一种突变微生物宿主细胞，其优选在其基因组中被修饰，从而如果与未被修饰的亲本微生物宿主细胞相比并且在相同条件下测量时导致选自以下的多肽的生成缺陷：

a.根据SEQ ID NO:3的多肽或与其至少70％相同的多肽，优选具有根据SEQ IDNO:3的多肽的至少一种活性的与其至少70％相同的多肽；

b.SEQ ID NO:3中包含的成熟多肽或与其至少70％相同的多肽，优选具有SEQ IDNO:3中包含的成熟多肽的至少一种活性的与其至少70％相同的多肽；