[发明专利]用于在体内产生双重特异性免疫球蛋白或者仅高变重链免疫球蛋白的转基因非人脊椎动物

权利要求书

1.在非人脊椎动物中产生包含体细胞高变的可变区的多肽链的方法，所述方法包括：

(a)在脊椎动物中在幼B细胞中表达IgM抗体，其中所述抗体包含分别从重链和轻链基因座中表达的重链和轻链；

(b)用预定的表位免疫所述脊椎动物，并获得在至少一些重链基因座中的同种型转换及已经经历体细胞高变的非-μ抗体的表达，其中所述抗体包含缺少CH1结构域的重链及包含特异性结合所述抗原的可变区；及

(c)通过选择结合所述表位的可变区从所述免疫的脊椎动物中选择一或多个多肽链，其中每个选择的链包含特异性结合所述表位的体细胞高变的可变区；及

所述方法进一步包括在不存在轻链表达时表达步骤(b)中的非-μ抗体。

2.权利要求1的方法，其中所述非-μ抗体是IgG。

3.权利要求1或2的方法，其中所述脊椎动物是小鼠。

4.权利要求1或2的方法，其中所述脊椎动物是大鼠。

5.权利要求1或2的方法，包括从所述免疫的脊椎动物中分离表达包含结合所述表位的体细胞高变的可变区的多肽链的B细胞。

6.权利要求3的方法，包括从所述免疫的脊椎动物中分离表达包含结合所述表位的体细胞高变的可变区的多肽链的B细胞。

7.权利要求4的方法，包括从所述免疫的脊椎动物中分离表达包含结合所述表位的体细胞高变的可变区的多肽链的B细胞。

8.权利要求5的方法，进一步包括使所述细胞永生化或者从中产生杂交瘤。

9.权利要求6或7的方法，进一步包括使所述细胞永生化或者从中产生杂交瘤。

10.非人脊椎动物细胞或者杂交瘤，其基因组包含抗体重链基因座和抗体轻链基因座，所述轻链基因座包含：

(a)在5’至3’方向包含可变区和恒定区，以在表达IgM抗体的淋巴细胞中表达轻链；及

(b)在表达非-μ抗体的淋巴细胞中关闭轻链表达的构件。

11.权利要求10的细胞或杂交瘤，其是大鼠细胞。

12.权利要求10的细胞或杂交瘤，其是小鼠细胞。

13.非人脊椎动物细胞，其中所述细胞基因组包含：

(i)功能性抗体轻链基因座，以表达轻链；

(ii)抗体重链基因座，其在5’至3’方向包含重排或未重排的可变区、第一个转换序列、μ恒定区、第二个转换序列及缺少CH1基因区段的非-μ恒定区，以表达包含IgM型重链和轻链的IgM抗体；及IgM至非-μ同种型转换以在不存在轻链时产生包含一或多个非-μ型重链的非-μ抗体，每个重链均缺少CH1结构域；及

(iii)关闭轻链表达的构件，其中在同种型转换为所述非-μ型抗体之后功能性轻链不表达。

14.权利要求13的细胞，其是小鼠细胞。

15.权利要求13的细胞，其是大鼠细胞。

16.权利要求13、14或15的细胞，其是淋巴细胞。

17.权利要求13、14或15的细胞，其中关闭轻链表达的构件包括核苷酸序列，其是从所述轻链基因座中表达功能性轻链必需的，其中所述核苷酸序列在表达IgM的幼B细胞中是功能性的，但是所述核苷酸序列在表达所述非-μ型抗体的成熟B细胞中不存在或者无功能。

18.权利要求16的细胞，其中关闭轻链表达的构件包括核苷酸序列，其是从所述轻链基因座中表达功能性轻链必需的，其中所述核苷酸序列在表达IgM的幼B细胞中是功能性的，但是所述核苷酸序列在表达所述非-μ型抗体的成熟B细胞中不存在或者无功能。

19.权利要求17的细胞，其中所述核苷酸序列是轻链可变区或者轻链基因座的CL区。

20.权利要求18的细胞，其中所述核苷酸序列是轻链可变区或者轻链基因座的CL区。

21.权利要求16的细胞，其是永生化B细胞或从B细胞中产生的杂交瘤，其中所述B细胞表达所述非-μ抗体，其中所述抗体特异于抗原。

22.权利要求18的细胞，其是永生化B细胞或从B细胞中产生的杂交瘤，其中所述B细胞表达所述非-μ抗体，其中所述抗体特异于抗原。

23.权利要求20的细胞，其是永生化B细胞或从B细胞中产生的杂交瘤，其中所述B细胞表达所述非-μ抗体，其中所述抗体特异于抗原。