[发明专利]用于快速检测扩增的核苷酸序列的方法和设备

权利要求书

1.一种用于PCR扩增和用于检测至少一种靶核苷酸序列的方法，所述方法包括以下连续步骤：

a)提供包括以下各项的设备：

-具有包括在0.01mm至10mm之间的区段的通道(3)，

-与所述通道(3)流体连通的测试条带(4)，所述测试条带(4)包括针对所述扩增的靶核苷酸序列中的至少一个第一序列部分的一种或多种第一互补和特异性探针，或者不同且互补的分子对中的至少一个第一分子，能够结合来自所述分子对的第二分子，所述第二分子结合至所述扩增的靶核苷酸序列的所述第一序列部分；

-用于产生至少4个不同且恒定温度的区域的装置，至少2个或3个区域位于所述通道(3)的不同位置，而第4区域位于所述测试条带(4)处，

b)将包括样品以及用于所述靶核苷酸序列的扩增试剂的溶液引入所述通道(3)中，

c)通过使所述溶液在所述通道(3)中根据恒定动态流动环流，产生所述靶核苷酸序列的扩增的和可选地标记的序列，

d)使所述扩增的序列与所述测试条带(4)接触，以及

e)通过第一探针和所述扩增的序列之间的杂交产生形成可测量的检测信号的复合物，

其中，所述信号的读出与食品的污染物的识别相关。

2.一种用于快速扩增和检测至少一种靶核苷酸序列的设备，包括用于应用根据权利要求1所述的方法的装置，并且包括：

-具有包括在0.01mm至10mm之间的区段的通道(3)，

-与所述通道(3)流体连通的测试条带(4)，所述测试条带(4)包括待检测的扩增的所述靶核苷酸序列的第一序列部分的第一互补和特异性探针，或者不同且互补的分子对中的至少一个第一分子，并且能够结合所述分子对的第二分子，所述第二分子结合至扩增的所述靶核苷酸序列的所述第一序列部分，

并且其中，所述通道(3)包括通过3个不同的、恒定的温度的区域并且配置用于多个通过PCR基因扩增循环的多个环。

3.根据权利要求2所述的设备，包括用于产生至少4个不同且恒定温度的区域的装置，3个区域位于所述通道(3)的不同位置，而第四个位于所述测试条带(4)处。

4.根据权利要求2或3所述的设备，包括在所述通道(3)的端部的注射泵，确保所述通道(3)内的样品的引入以及恒定动态流动。

5.根据权利要求2或3所述的设备，进一步包括通过多重连接依赖式探针扩增MLPA的样品初步处理装置。

6.根据权利要求2或3所述的设备，其特征在于，所述测试条带(4)包括第一探针以及可选的第二探针，在扩增的所述核苷酸序列杂交后，所述第二探针能够在所述测试条带(4)的表面上以线或点的形式产生检测信号。

7.根据权利要求6所述的设备，其中，所述信号由4、6、8、9、10、12、14、16或32个点的网络组成。

8.一种用于至少一种靶核苷酸序列的PCR扩增和检测试剂盒，包括根据前述权利要求2至7中任一项所述的设备，以及用于通过PCR基因扩增和在测试条带(4)上进行寡色谱检测的介质和试剂。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，包括可选地标记的引物，可选地标记的探针和/或可选地用于稀释所述样品的组件，具体地缓冲溶液。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其中，所述标记选自由金属颗粒、聚苯乙烯颗粒、着色的或顺磁性颗粒、胶体颗粒或荧光成分组成的组。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述标记是荧光成分。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中，所述荧光成分是花青素或具有类似荧光特性的标记。

13.根据权利要求8至12中任一项所述的试剂盒，其中，所述不同且互补的分子对选自由链霉素/生物素、抗生物素蛋白/生物素、聚链霉素/生物素或抗生物素/生物素抗体组成的组。

14.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述花青素是吲哚二羰花青Cy5。