[发明专利]用于制备包含特异性结合靶的至少一种结合实体的抗体Fc区缀合物的方法及其用途

权利要求书

1.使用用于将抗体Fc区酶促缀合至至少一个结合实体的分选酶A生产抗体Fc区缀合物的方法，所述抗体Fc区缀合物包含作为第一组分的重组抗体Fc区和作为第二组分的至少一个特异性结合靶的结合实体，方法包括下列步骤：

—孵育i)特异性结合靶的结合实体，其选自包含Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')₂、双体抗体、线性抗体、scFv、scFab和dsFv的组，所述结合实体在其20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列GGGSLPX1TG，其中X1可以是任何氨基酸残基，以及ii)抗体Fc区，其在至少一个N末端包含氨基酸序列GGCPX4C或氨基酸序列GGHTCPX4C，其中X4是S或P，或者所述结合实体在其20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列GSLPX1TG，其中X1可以是任何氨基酸残基，以及ii)抗体Fc区，其在至少一个N末端包含氨基酸序列GGCPX4C，其中X4是S或P，与酶分选酶A，并

从而产生抗体Fc区缀合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于特异性结合靶的结合实体在20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列GSLPX1TGGSGS或GGGSLPX1TGGSGS，且其中X1可以是任何氨基酸残基。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于特异性结合靶的结合实体在20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列X2GSLPX1TGGSGS，其中X1可以是任何氨基酸残基，X2可以是除甘氨酸之外的任何氨基酸残基。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于特异性结合靶的结合实体在20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列GSLPX1TGGSGSX3或GGGSLPX1TGGSGSX3，其中X1可以是任何氨基酸残基，X3是氨基酸序列标签。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于特异性结合靶的结合实体在20个C末端氨基酸残基内包含氨基酸序列X2GSLPX1TGGSGSX3，其中X1可以是任何氨基酸残基，X2可以是除甘氨酸之外的任何氨基酸残基并且其中X3是氨基酸序列标签。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于抗体Fc区在其两个N末端彼此独立地都包含氨基酸序列GGCPX4C，其中X4彼此独立地是S或P。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于特异性结合靶的结合实体特异性结合第一表位或抗原且抗体Fc区包含特异性结合不同于第一表位或抗原的第二表位或抗原的第二结合实体。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于抗体Fc区包含由至少一个二硫键连接的两条多肽链。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于抗体Fc区包含两个二硫化物连接的全长重链抗体Fc区，或两个重链抗体Fc区片段，或与同族全长轻链配对的全长抗体重链，以及二硫化物连接的全长重链抗体Fc区，或与全长抗体重链Fc区多肽二硫化物连接的全长抗体重链。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于X1是E。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于抗体Fc区是人抗体Fc区或人抗体Fc区变体。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于人抗体Fc区或人抗体Fc区变体是人IgG1亚类的，或人IgG2亚类的，或人IgG3亚类的，或人IgG4亚类的。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于抗体Fc区是人IgG1亚类的或人IgG4亚类的人抗体Fc区。

14.根据权利要求11所述的方法，其特征在于抗体Fc区包含人抗体Fc区至少在以下氨基酸位置228、233、234、235、236、237、297、318、320、322、329和/或331中一处天然存在氨基酸残基向不同残基的突变，其中抗体Fc区中的残基根据Kabat的EU索引编号。