本文中报道了一种用于产生双特异性抗体的方法，包括步骤：孵育(i)在20个C末端氨基酸残基范围内包含氨基酸序列LPX1TG(SEQ ID NO:01)的抗体Fab片段或scFv抗体，(ii)包含全长抗体重链、全长抗体轻链和Fc重链的单臂抗体，其中全长抗体重链和全长抗体轻链是形成抗原结合位点的同族抗体链，其中全长抗体重链和Fc重链通过形成抗体铰链区的一个或多个二硫键彼此共价连接，并且其中Fc重链在其N末端具有寡甘氨酸氨基酸序列，和(iii)分选酶A。
本文报道按5’至3’方向包含以下的核酸：i)不含符合读框的翻译终止密码子的编码目的多肽的第一核酸片段，ii)与该第一核酸片段有效连接的第二核酸片段，其始于5免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号，和iii)与该第二核酸有效连接的第三核酸片段，其编码跨膜10结构域的至少一个片段，其中第二核酸片段在其3’端具有核苷酸序列CTACCACCCCCTTCCTGTCCAG(SEQ ID NO:29)或TGACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQ ID NO:14)或CTACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQ ID NO:31)。
