[发明专利]顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的生物学制备方法

权利要求书

1.顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸或其药学上可接受的盐或者它们的溶剂合物的制备方法，其包含，通过以可表达的状态含有下述(A)～(F)中任一多核苷酸的微生物，以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的步骤：

(A)由序列号2记载的碱基序列组成的多核苷酸；

(B)与由与序列号2记载的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交、并且编码具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(C)与序列号2记载的碱基序列具有至少85％以上的同一性、并且编码具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(D)编码由序列号25记载的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸；

(E)编码由在序列号25记载的氨基酸序列中置换、缺失、插入、和/或添加1个或多数氨基酸而成的氨基酸序列组成、并且具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(F) 编码由与序列号25记载的氨基酸序列具有至少85％以上同一性的氨基酸序列组成、并且具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸。

2.权利要求1中记载的制备方法，其中所述微生物以可表达的状态进一步含有：编码具有催化以L-赖氨酸为底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反应的活性的蛋白质的多核苷酸、以及编码具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸为底物生成L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸，所述方法进一步包含：

以L-赖氨酸为底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛、随后将L-氨基己二酸-Δ-半醛转化为Δ1-哌啶烯-6-甲酸的步骤；以及

以Δ1-哌啶烯-6-甲酸为底物生成L-六氢吡啶甲酸的步骤。

3.权利要求2中记载的制备方法，其中所述编码具有催化以L-赖氨酸为底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反应的活性的蛋白质的多核苷酸从泥色黄杆菌(Flavobacterium　lutescens)衍生。

4.权利要求2或3中记载的制备方法，其中所述微生物是大肠杆菌，其原本具有编码具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸为底物生成L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸。

5.下述(A)～(F)中任一多核苷酸：

(A)由序列号2记载的碱基序列组成的多核苷酸；

(B)与由与序列号2记载的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交、并且编码具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(C)与序列号2记载的碱基序列具有至少85％以上的同一性、并且编码具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(D)编码由序列号25记载的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸；

(E)编码由在序列号25记载的氨基酸序列中置换、缺失、插入、和/或添加1个或多数氨基酸而成的氨基酸序列组成、并且具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸；

(F) 编码由与序列号25记载的氨基酸序列具有至少85％以上同一性的氨基酸序列组成、并且具有催化以L-六氢吡啶甲酸为底物生成顺式-5-羟基-L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸。

6.转化用载体，其包含权利要求5中记载的多核苷酸。

7.权利要求6中记载的微生物的转化用载体，其进一步包含编码具有催化以L-赖氨酸为底物生成L-氨基己二酸-Δ-半醛的反应的活性的蛋白质的多核苷酸。

8.权利要求6或7中记载的微生物的转化用载体，其进一步包含编码具有催化生成α-酮戊二酸的反应的活性的蛋白质和/或具有催化以Δ1-哌啶烯-6-甲酸为底物生成L-六氢吡啶甲酸的反应的活性的蛋白质的多核苷酸。

9.基因重组微生物，其通过权利要求6～8的任一项中记载的载体转化。