[发明专利]一种利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法

权利要求书

1.一种利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，以菌种保藏编号为CGMCC No.8044的环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）HG12菌株为生产菌种，其特征为，包括如下步骤：（1）将环状芽孢杆菌HG12菌株的液体种子按体积比为3-5%的接种量接种到液体发酵培养基中，在37-40℃、160-200r/min下，发酵36-60h，制得发酵液，将发酵液用微孔滤膜过滤，收集滤出液，调pH值为5.0-6.0，制得含有4-乙烯基愈创木酚的滤出液；（2）向滤出液中接种体积比为5-10%接种量的酒香酵母菌株的液体种子，在28-30℃下，发酵12-36h，制得含有4-乙基愈创木酚的发酵液；（3）将发酵液用微孔滤膜过滤，收集滤出液，向滤出液中加入萃取剂，混合均匀，静置分相，制得含有4-乙基愈创木酚的萃取液，将萃取液真空蒸发，制得4-乙基愈创木酚。

2.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（1）中，环状芽孢杆菌HG12菌株的液体种子的制备步骤为，取蒸馏水1000mL，加入葡萄糖10.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、NaCl 5.0g，混合均匀，调溶液的pH值为7.0，将溶液在121℃下、灭菌20min，制得液体种子培养基；从试管斜面上挑取1-2环环状芽孢杆菌HG12菌株接种到液体种子培养基中，在35-40℃、120-160r/min下，培养12-16h，制得活化后的液体种子。

3.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（1）中，液体发酵培养基的制备步骤为，取小麦麸皮300g，加水1000mL，混合均匀，于100℃下、蒸煮10-20min，调pH值为6.0-6.5，121℃下、灭菌30min，降温至35-40℃，加入木聚糖酶和阿魏酸酯酶，保温20-24h，制得液体发酵培养基；木聚糖酶的用量为20.0U/g麸皮，阿魏酸酯酶的用量为10.0U/g麸皮。

4.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（2）中，酒香酵母菌株的液体种子的制备步骤为，取蒸馏水1000mL，加入葡萄糖20.0g、蛋白胨20.0g、酵母膏10.0g、KH₂PO₄ 2.0g、MgSO₄ 1.0g，混合均匀，调溶液的pH值为6.0，将溶液在121℃下、灭菌20min，制得液体种子培养基；从试管斜面上挑取1-2环酒香酵母菌株接种到液体种子培养基中，在28-30℃、100-200r/min下，培养20-24h，制得活化后的液体种子。

5.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（2）中，酒香酵母菌株为间型酒香酵母CICC32929、酒香酵母属CICC31575或异型酒香酵母CICC32915。

6.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（1）和（3）中，微孔滤膜的工作压力均为0.05-0.1MPa，微孔滤膜的孔径均为0.2-0.6μm。

7.根据权利要求1所述的利用微生物发酵生产4-乙基愈创木酚的方法，其特征在于：步骤（3）中，萃取剂为乙酸丁酯或乙酸戊酯，其用量为滤出液体积百分比的20-30%。