[发明专利]一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的基因扩增位点位于HIV基因组的5’LTR保守区域。

2.一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和HIV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液A、漂洗液B、漂洗液C、洗脱液、磁珠液；HIV核酸扩增试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HIV-内标、HIV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。

3.如权利要求2所述的一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.5-2.5%，Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，异硫氰酸胍2-6.0mol/L，1-10mM/L EDTA（PH7.5）；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液A组成为含有Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化锂0.5-1mol/L；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液B组成为含有Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钾0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液C组成为含有Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mmol/L Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。

4.如权利要求2所述的一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HIV核酸扩增试剂盒中RT-PCR反应液包括用于检测靶基因和内标的探针、用于扩增靶基因和内标的上游引物以及下游引物、RT-PCR缓冲液；HIV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针序列为：5'-ATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAGCT-'3（SEQ ID NO:1），5'端标记为FAM荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于内标检测的探针序列为：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ ID NO:2），5'端标记为HEX荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增靶基因的上游引物序列为：5'-CCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAG-'3（SEQ ID NO:3）；用于扩增靶基因的下游引物序列为：5'-TCACACAACAGACGGGCACACAC-'3（SEQ ID NO:4）；用于扩增内标的上游引物序列为：5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ ID NO:5）；用于扩增内标的下游引物序列为：5'-TTCTCAGGACTCCAGTCGCTG-'3（SEQ ID NO:6）。

5.如权利要求2或4所述的一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HIV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针使用浓度为5-20pmol，优选靶基因探针使用浓度为8pmol；用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol，优选内标探针使用浓度为8pmol；用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为10-30pmol，优选靶基因上下游引物使用浓度为20pmol；用于检测内标的上下游引物使用浓度为5-20pmol，优选内标上下游引物使用浓度为8pmol。

6.如权利要求2所述的一种艾滋病（HIV-1）高精确核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HIV核酸扩增试剂盒中RT-PCR缓冲液组成为50mmol/LTris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)₂SO₄，75mmol/LKCl，2.5mmol/LMgSO₄，0.15mmol/L dNTPs。