[发明专利]用于检测菊黄东方鲀生长速度的引物对、试剂盒及方法有效
申请号: | 201310654871.0 | 申请日: | 2013-12-05 |
公开(公告)号: | CN103805695A | 公开(公告)日: | 2014-05-21 |
发明(设计)人: | 张之文;张根玉;施永海;张海明;张中华;徐嘉波;邓平平 | 申请(专利权)人: | 上海市水产研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人: | 吴干权 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 东方 生长 速度 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测菊黄东方鲀的引物对,其特征在于引物对由:碱基序列为SEQ ID NO:3的上游引物和SEQ ID NO:4的下游引物组成。
2.一种用于检测菊黄东方鲀生长速度的试剂盒,其特征在于其中含有权利要求2所述的引物对,以及生长速度快的菊黄东方鲀标记MARKER。
3.一种检测菊黄东方鲀生长速度的方法,其特征在于由以下步骤组成:
提取样品菊黄东方鲀的肌肉生长抑制因子的DNA序列,
利用权利要求2试剂盒中的引物对将样品菊黄东方鲀的DNA进行PCR扩增;
将扩增产物进行PAGE、染色,
观察条带大小,与MARKER条带大小一致的为生长速度快的个体。
4.如权利要求3所述的检测菊黄东方鲀生长速度的方法,其特征在于所述的PCR扩增反应体系20μL,包括2uL10×PCR缓冲液,0.8ul10mmol/L的dNTP mix,0.4μmol/L的上游引物,0.4μmol/L的下游引物,30ng的样品菊黄东方魨DNA。
5.权利要求3所述的检测菊黄东方鲀生长速度的方法,其特征在于所述的PCR扩增反应条件为,94℃下变性3分钟,94℃下变性30秒,64℃下复性30秒,及72℃下延伸30秒,共42个循环,最后72℃延伸10min。
6.如权利要求3所述的检测菊黄东方鲀生长速度的方法,其特征在于所述的PAGE的步骤为:
取等量的变性上样缓冲液分别加入PCR产物及试剂盒中MARKER中,99℃变性10分钟,在尿素变性PAGE(6%)中进行电泳至溴酚蓝跑出PAGE,进行银染,固定,染色及显色。
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