[发明专利]一种人工合成的麦胚肽及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种人工合成的麦胚肽及其制备方法与应用。

背景技术

据统计，全世界60岁以上老年人口总数已达到6亿，其中有60多个国家的老年人口达到或超过人口总数的10%，进入了老龄化社会行列。人口老龄化的迅速发展及引起的一系列问题，引起了世界各国政府的重视和关注。截至目前，我国60岁及以上老年人口达1.85亿，占总人口的比重达13.7%，预计到“十二五”末，全国老年人口将增加4300多万，达到2.21亿。随着年龄的增长，许多器官可能会出现功能障碍，这种功能障碍发展到一定程度便表现出症状，这便是“老年病”。我国两大主要老年病阿尔茨海默病（AD）和帕金森病（PD）的患病人数已达1500万以上，由于目前尚无有效的治疗药物，使得这些疾病严重降低了患者的生活质量，也给整个社会和家庭带来巨大压力和负担。而根据流行病学日前的研究发现，老年人群若长期补充一定剂量的抗氧化剂，可以有效降低心脑血管疾病和癌症的发病率。因此，减少自由基、抗氧化治疗在PD和AD患者治疗中的作用日益受到药物研究者和临床医学家的重视。

近年来，抗氧化肽类作为一种非酶类自由基清除剂的研究正在兴起。现已经报道从食物蛋白源中酶解或提取的具有抗氧化活性的肽包括麦胚肽，大豆肽、牛乳清蛋白肽、玉米肽、小麦谷蛋白肽等。

麦胚是小麦加工的副产物，是具有生命活力的植物胚胎。麦胚蛋白经过适当的蛋白酶水解及纯化后，生成的麦胚多肽不仅易于消化吸收，更具有清除自由基、抑制脂质过氧化的作用，可将其作为食品和医药领域潜在的抗氧化剂来进行开发。目前研究已证实麦胚肽在体外具有较强的清除自由基的能力。然而，麦胚肽的提取、分离纯化过程过于繁琐、复杂，不能保证产品品质的稳定。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种人工合成的麦胚肽及其制备方法，以及其作为抗氧化剂在制备预防与神经细胞氧化应激相关疾病药物中的应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种人工合成的具有抗氧化应激活性的麦胚肽，其氨基酸序列为Arg-Val-Phe，结构式如下：

进一步地，其是以N-芴甲氧羰基保护的苯丙氨酸为原料，通过两次缩合反应，依次分别连接由N-芴甲氧羰基保护的缬氨酸和精氨酸，生成麦胚肽。

本发明还提供了一种前述麦胚肽的制备方法，包括如下步骤：

（1）树脂溶胀；

（2）脱除氨基保护；

（3）二肽的合成；

（4）三肽的合成；

（5）麦胚肽树脂切割；

（6）析出麦胚肽。

其中，所述步骤（1）为将30mmol的Fmoc-L-苯丙氨酸-王树脂置于反应器中，用300mL二氯甲烷浸泡，待树脂膨胀，溶胀30min，抽滤除去二氯甲烷。

其中，所述步骤（2）为加入体积比为2:8的六氢吡啶与N,N-二甲基甲酰胺混合溶液浸泡步骤（1）所得树脂，使用氮气鼓动，反应结束后用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂。

其中，所述步骤（3）为将溶有18mmol Fmoc-L-缬氨酸的溶液150mL与溶有100mmol N,N′-二异丙基碳酰亚胺和90mmol 1-羟基苯骈三氮唑的溶液120mL在冰浴下混合，反应0.5h；然后与步骤（2）处理过的树脂混合，再加16.5mmol的4-二甲氨基吡啶，室温下反应5h；过滤，用N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇分别洗涤三次，每次3min；将450mL无水吡啶、90mL乙酸酐溶于600mL N,N-二甲基甲酰胺后倒入树脂中，反应2h；反应结束后用N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇各1000mL轮流洗涤树脂三次，每次3min，真空干燥。

其中，所述步骤（4）为重复步骤（2）-（3），将步骤（3）中的Fmoc-L-缬氨酸替换为Fmoc-L-精氨酸，连接Fmoc-L-精氨酸完成三肽合成，将树脂用二氯甲烷和乙醚浸泡后抽干。

其中，所述步骤（5）为将所得三肽-树脂置于砂芯反应器中，加入750mL切割试剂，反应2h，过滤，旋转蒸发浓缩滤液，在浓缩液中加入600mL冰乙醚，析出沉淀，在5000r/m下离心10min，然后弃去上清液，真空干燥沉淀；其中，所述切割试剂为体积分数为2.5%水，2.5%三异丙基硅烷和95%三氟乙酸混合而成。

其中，所述步骤（6）为滤去树脂，向滤液中加入无水乙醚，用离心机离心后获得固体，加入无水乙醚洗涤，再离心，重复数次后经HPLC脱盐、冻干即可获得麦胚肽。