[发明专利]利那洛肽的制备方法

权利要求书

1.具有如下结构的利那洛肽的制备方法，

其特征在于：包括如下步骤：

（1）采用固相Fmoc技术，将羧基树脂和侧连带有保护基的Fmoc酪氨酸置于反应瓶中，加入有机碱和偶合剂，在DMF溶液中反应后，脱除Fmoc保护基团，得到与侧连带有保护基的酪氨酸偶联的树脂；

（2）将步骤（1）得到的与侧连带有保护基的酪氨酸偶联的树脂直接和侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸置于反应瓶中，加入有机碱及偶合剂，在DMF溶液中反应后,脱除Fmoc保护基团，得到进一步与侧连带有保护基的半胱氨酸偶联的树脂；

（3）依次重复步骤（2），其中原料氨基酸依次替换为Fmoc甘氨酸、侧连带有保护基的Fmoc苏氨酸、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸、Fmoc丙氨酸、Fmoc脯氨酸、侧连带有保护基的Fmoc天冬酰胺、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸、侧连带有保护基的Fmoc苏氨酸、侧连带有保护基的Fmoc谷氨酸、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸，最终得到脱除Fmoc保护基团、且与上述氨基酸依次偶联的树脂；

（4）切割步骤（3）所得与上述氨基酸依次偶联的树脂，得到化合物：

HO-Tyr-Cys-Gly-Thr-Cys-Ala-Pro-Asn-Cys-Cys–Tyr-Glu-Cys-Cys-H；

（5）将步骤（4）所得化合物用单质碘在pH=6-13的磷酸钠缓冲溶液中氧化,形成三个二硫键得到利那洛肽产品：

2.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述侧连带有保护基的Fmoc酪氨酸、侧连带有保护基的Fmoc半胱氨酸、侧连带有保护基的Fmoc苏氨酸、侧连带有保护基的Fmoc天冬酰胺、侧连带有保护基的Fmoc谷氨酸依次为叔丁基保护的Fmoc酪氨酸、三苯甲基保护的Fmoc半胱氨酸、Trt保护的Fmoc苏氨酸、Trt保护的Fmoc天冬酰胺、tBu保护的Fmoc谷氨酸。

3.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述羧基树脂为王树脂；所述有机碱为二异丙基乙基氨；所述偶合剂为苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐。

4.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述各种侧连带有保护基的Fmoc氨基酸与羧基树脂的摩尔比均为2～8/1。

5.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述偶合剂与羧基树脂摩尔比2～8/1。

6.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述碱与各种侧连带有保护基的Fmoc氨基酸摩尔比均为2～6/1。

7.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述脱除Fmoc保护基团的体系是六氢哌啶/DMF混合液；所述六氢哌啶/DMF混合液的体积比1/4，所述六氢哌啶/DMF混合液加入量为10-30mL/g树脂。

8.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中磷酸钠缓冲溶液中单质碘的含量2-15%。

9.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中氧化的时间为6-12h，氧化的温度为15-30℃。

10.根据权利要求1所述的利那洛肽的制备方法，其特征在于，所述氧化二硫键反应位置发生在按N端到C端的顺序：1位和6位、5位和13位、2位和10位半胱氨酸双硫键。