[发明专利]磷脂酶C突变体及其用途

说明书

本申请提供了蜡样芽胞杆菌的野生型磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C的突变体，涉及的突变包括第63位的天冬酰胺突变为其他氨基酸，还可以包括第20位的精氨酸至组氨酸以及第83位的丙氨酸至天冬氨酸的突变。本申请还提供了编码所述突变体的核酸分子、包含所述核酸分子的载体以及包含所述核酸分子或载体的细胞。本申请还提供了所述突变体、核酸分子载体以及细胞的用途。

发明领域

本申请涉及磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C突变体及其用途。

发明背景

脱胶是油脂精炼的重要步骤，传统的水化脱胶法经济成本高，物料能耗大，环境污染重，所以近些年来，很多工作致力于将酶法脱胶用于油脂精炼中的脱胶环节。同传统方法相比，酶法脱胶能够提高经济效益，实现节能减排，对生态环境污染少，在环保、经济、质量等方面具有较大的优势。油脂脱胶中所用的一种酶为磷脂酶。同其他脱胶酶相比，磷脂酶C(PLC)表现出更大的优势，例如，增加甘二酯(DAG)的得率，以及减少得油量的损失。

蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(BC-PC-PLC)是研究较早的一种磷脂酶C。BC-PC-PLC全长为283个氨基酸，其中包含24个氨基酸的信号肽和14个氨基酸的前导肽，成熟肽为245个氨基酸(参见，例如Johansen,T.,Holm,T.,Guddal,P.H.,Sletten,K.,Haugli,F.B.,Little,C.(1988).Cloning and sequencing of thegene encoding the phosphatidylcholine-preferring phospholipase C of Bacilluscereus.Gene65(2):293-304)。

BC-PC-PLC的晶体结构已有报道，其由多个螺旋结构域组成，催化位点为55位天冬氨酸，并且含有至少三个Zn²⁺结合位点(参见，例如Hough.,E.,Hansen,L.K.,Birknes,B.,Jynge,K.,Hansen,S.,Hordvik,A.,Little,C.,Dodson,E.,Derewenda,Z.(1989)High-resolution(1.5A)crystal structure of phospholipase C from Bacillus cereus.Nature.338:357-60)。BC-PC-PLC的异源表达研究较少，已有报道涉及在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和毕赤酵母(pichia pastoris)中表达BC-PC-PLC(参见，例如Durban,M.A.,Silbersack,J.,Schweder,T.,Schauer,F.,Bornscheuer,U.T.(2007)Highlevel expression of a recombinant phospholipase C from Bacillus cereus inBacillussubtilis.Appl Microbiol Biotechnol74(3):634-639;以及Seo,K.H,Rhee J.I.(2004)High-level expression of recombinant phospholipase C from Bacilluscereus in Pichia pastoris and its characterization.Biotechnol Lett26(19):1475-1479)。

本领域中需要改进的(例如酶活性更高的)磷脂酶C。

发明概述

第一方面，本申请提供了具有磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C活性的多肽，所述多肽包含突变的SEQ ID No:2所示的氨基酸序列或其活性片段，其中所述突变包括将SEQ ID No:2所示的氨基酸序列的第63位的天冬酰胺进行突变。