[发明专利]一种检测甘蔗赤条病菌的荧光定量PCR试剂盒

权利要求书

1.一种检测甘蔗赤条病菌的荧光定量PCR试剂盒，包括Taqman探针QPCR-P5和引物对QPCR-F5、QPCR-R5，其中Taqman探针QPCR-P5序列为5’-CACCATCACGAAATCAATGCAGCA-3’，探针的5’端和3’端分别采用荧光基团FAM和TAMRA进行修饰；引物对QPCR-F5和QPCR-R55序列为5’-CGGGAAACCCATAATACCAC-3’和5’-GTCGATTTCTGCTGGTGAGA-3’。

2.一种用于甘蔗赤条病菌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于该试剂盒由下列试剂组成：

（1）阳性标准品：采用常规PCR扩增含有16S-23S rDNA间隔区的DNA作为标准样品，1×10¹⁰拷贝/μL，50 μL/瓶，-20℃冷冻保存；

（2）阴性对照：采用无甘蔗赤条病菌感染的甘蔗叶片组织，提取叶片总DNA为阴性对照，100 ng/μL，50 μL/瓶，-20 ℃冷冻保存备用；

（3）PCR反应液：每个反应包括5×PCR缓冲液5.0 μL、10 mmol dNTPs 0.5 μL、25 mmol MgCl₂ 2.0 μL，以及权利要求1所述的引物对，浓度为10 μmol/L的QPCR-F5和QPCR-R5各2.0 μL，共11.5 μL，50个反应体系共计575 μL，-20 ℃保存备用；

（4）Ex Taq酶：每个反应体系包括5 U/μL Ex Taq酶0.5 μL，50个反应体系共计25 μL，-20℃保存备用；

（5）探针溶液：如权利要求1所述的Taqman探针QPCR-P5，采用5’-FAM和3’-TAMRA修饰，合成后采用无菌水稀释，浓度为10 μmol/L，每个反应体系0.4 μL，50个反应体系共计20 μL，-20℃保存备用；

（6）无菌水：2×10 mL/瓶。