[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争 AlphaLISA检测试剂盒及其方法

权利要求书

1. 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：包括供体微珠、受体微珠、猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体及带His标签的N蛋白抗原；

其中，所述供体微珠为螯合镍的供体微珠，PE,AS101D；所述受体微珠为抗鼠IgG受体微珠，PE,AL105C；

所述带His标签的N蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有与N蛋白抗原同等功能的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：所述供体微珠80μg/mL、受体微珠80μg/mL、猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体100nM/L及带His标签的N蛋白抗原180nM/L；

使用时，以总体系20μL计，每孔添加量为：80μg/mL供体微珠5μL、 80μg/mL受体微珠3μL、180nM/L带His标签的N蛋白抗原 5μL、100nM/L猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体 5μL及待测样本2μL。

3.根据权利要求1或2所述猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：编码所述带His标签的N蛋白抗原的基因为PRRSV N基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

4.根据权利要求3所述猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争AlphaLISA检测试剂盒，其特征在于：所述PRRSV N基因是通过RT-PCR扩增反应得到的；RT-PCR扩增反应的上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.3，下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4。

5.利用权利要求1或2所述试剂盒进行猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体竞争AlphaLISA检测的非疾病诊断目的的检测方法，包括如下步骤：

1）反应板的待测孔中每孔加入2μL待测样本，反应板的对照孔中加入2μL 1×稀释缓冲液；

2）每孔加入5μL 180nM/L带His标签的N蛋白抗原和5μL 100nM/L猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体，1000rpm 离心10 sec，室温23℃避光孵育1h；

3）每孔加入80μg/mL受体微珠3 μL 、80μg/mL供体微珠5μL，1000rpm 离心10 sec，室温23℃避光孵育30 min；

4）结果读取：将反应板置Enspire（PE）AlphaLISA检测系统中读值。