[发明专利]一种利用3基因聚合效应选育山羊产羔性状的方法

权利要求书

1.一种利用3基因聚合效应选育山羊产羔性状的方法，其特征在于，以山羊基因组DNA为模板，在PCR条件下，利用3对引物P1、P2和P3，分别扩增干细胞因子（SCF）基因的3'非翻译区，III型跨膜酪氨酸激酶受体（KIT）基因外显子7和亲吻素（KISS1）基因的内含子1，其中：

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5'-CCTCAGAAGTGAAGGTGCAGAGTCC-3'；

下游引物1R：5'-CAATGAGGACCAGTCATGTGCCAG-3'；

所述的引物P2如下：

上游引物2F：5'-GGTAGGTGATCCACAGGT-3'；

下游引物2R：5'-TGGTCAGCGAATTGTAGG-3'；

所述的引物P3如下：

上游引物3F：5'-CCCGCTGTAACTAGAGAAAG-3'；

下游引物3R：5'-CATCCAGGGTGAGTGATACT-3'；

引物P1扩增干细胞因子（SCF）基因的3'非翻译区，用于筛查山羊干细胞因子（SCF）基因的3'非翻译区位点的突变；

引物P2扩增III型跨膜酪氨酸激酶受体（KIT）基因外显子7，用于筛查山羊III型跨膜酪氨酸激酶受体（KIT）基因外显子7位点的突变；

引物P3扩增亲吻素（KISS1）基因的内含子1，用于筛查山羊亲吻素（KISS1）基因内含子1位点的突变；

用浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳对3对引物扩增产物进行大小判定，然后采用DNA测序技术筛查到干细胞因子（SCF）基因的3'非翻译区，III型跨膜酪氨酸激酶受体（KIT）基因外显子7和亲吻素（KISS1）基因的内含子1共有3个碱基的突变；

再利用浓度为10%聚丙烯酰胺凝胶和浓度为3.5%琼脂糖凝胶电泳对这3个位点的SNPs进行基因分型和基因频率分析，分析不同基因型组合与山羊产羔数之间的关系，挑选最佳的基因型组合，分析拥有最佳基因型组合个体的选配方式，应用这些选配方式形成山羊多羔的多基因聚合良种核心群。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增的条件是：

15μL反应体系：包括DNA模板50ng，7.5μl2×Taq MasterMix，10μM的上下游引物各0.3μl，加灭菌水至15μl；

PCR反应程序如下：

1）利用引物P1的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸35s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2）利用引物P2的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸35s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

3）利用引物P3的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸35s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的干细胞因子（SCF）基因的3'非翻译区在17025bp存在C→A的突变；所述的III型跨膜酪氨酸激酶受体（KIT）基因外显子7在88430bp存在T→A的突变；所述的亲吻素（KISS1）基因的内含子1在2124bp存在T→A的突变。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因分型是用浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶和浓度为3.5%的琼脂糖凝胶电泳分析引物P1、P2和P3的PCR扩增产物，结果如下：

引物P1位点：纯合型CC在17025bp位的碱基是C，杂合型CA在17025bp位的碱基是C/A，纯合型AA在17025bp位的碱基是A；

引物P2位点：纯合型TT在88430bp位的碱基是T，杂合型TA在88430bp位的碱基是T/A，纯合型AA在88430bp位的碱基是A；

引物P3位点：纯合型TT在2124bp位的碱基是T，杂合型TA在2124bp位的碱基是T/A，纯合型AA在2124bp位的碱基是A。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的最佳基因型组合为C22（CCTTTT）；产羔数最低的基因型组合为C5（CATTAA）。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的不同基因型组合对山羊产羔数的影响为：

C22（CCTTTT）组合基因型个体第2和4胎产羔数显著高于C2（CATAAA）和C5（CATTAA）型个体；C22（CCTTTT）组合基因型个体第3胎和平均胎次的产羔数显著高于C1（AAAAAA）、C2（CATAAA）、C3（CCTAAA）和C5（CATTAA）型个体；C5（CATTAA）组合基因型个体平均胎次的产羔数显著低于C12-C15和C17-C22型个体。