[发明专利]一种嗜热毁丝霉的发酵物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种嗜热毁丝霉的发酵物及其制备方法和应用。

背景技术

纤维素酶(cellulase)是一种能够将纤维素降解为葡萄糖的复合酶系，包括：（1）内切葡聚糖酶(endo-β-1,4-D-glucanase，EG,EC3.2.1.4)，也称CMC酶；（2）外切葡聚糖酶(exo-β-1,4-glucanase,EC3.2.1.91)或纤维二糖水解酶(cello-biohydrolases,CBH)；（3）葡萄糖苷酶(β-1,4-D-glucosidase,BG,EC3.2.1.21)，也叫水杨甙酶。以上三种酶中，每一类都有多个同工酶。内切酶将长链纤维素从内部切断，外切酶自纤维素链的还原端或非还原端切下二糖或寡糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖或寡糖水解为葡萄糖。随着纤维素酶在工业上的广泛应用（如食品、饲料、酿造、造纸，特别是在纺织工业和生物能源上的应用），纤维素酶已经成为最近十几年酶工程研究的一个热点。

到目前为止，已发现了多种能够产生纤维素酶的微生物，涵盖了厌氧与好氧、原核与真核微生物。在产生纤维素酶的微生物中，不同菌株所产纤维素酶具有不同的作用方式与底物特异性。根据其酶学性质与应用环境，纤维素酶又被分为酸性纤维素酶、中性纤维素酶与碱性纤维素酶。酸性纤维素酶主要用于生物能源、纺织水洗等。中性纤维素酶主要用于纺织水洗工业。碱性纤维素酶则可用于洗涤剂中。

工业生产上常用的产纤维素酶微生物是常温、中温丝状真菌，它们能够产生完整的纤维素酶系，可以将结晶纤维素完全降解为葡萄糖，如木霉（Trichoderma sp.）、青霉（Penicillium sp.）、腐质霉（Humicola sp.）等。上述菌株产生的纤维素酶大多需要在50℃以下发挥较好的效能，而在较高的温度下容易失活。高温纤维素酶在生物能源领域具有较好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种嗜热毁丝霉的发酵物及其制备方法和应用。

本发明提供了一种制备发酵物的方法，包括如下步骤：将嗜热毁丝霉（Myceliophthora thermophila）ACCC No.30572接种至发酵培养基，40-55℃、100-300r/min振荡培养5-9天；

所述发酵培养基按照如下方法制备：将碳源、氮源、硫酸铵、磷酸二氢钾、碳酸钙、硫酸镁、甘油、吐温-80和水混合，得到发酵培养基；所述碳源在所述发酵培养基中的浓度为25-60g/L（如25g-33g、33g-40g、40g-50g、50g、60g、25g、33g、40g、50g或60g），所述氮源在所述发酵培养基中的浓度为10-40g/L，所述硫酸铵在所述发酵培养基中的浓度为1-10g/L，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为1-10g/L，所述碳酸钙在所述发酵培养基中的浓度为1-4g/L，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.5-4g/L，所述甘油在所述发酵培养基中的浓度为1-4g/L，所述吐温-80在所述发酵培养基中的浓度为0.5-3g/L。

所述发酵培养基的pH可为4-6，具体可为5。

所述碳源可为微晶纤维素、玉米芯或稻草粉。

所述氮源可为玉米浆、玉米浆干粉、大豆胨、蛋白胨、酵母粉或胰蛋白胨。

所述碳源在所述发酵培养基中的浓度具体可为50g/L，所述氮源在所述发酵培养基中的浓度具体可为27g/L，所述硫酸铵在所述发酵培养基中的浓度具体可为5g/L，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度具体可为6g/L，所述碳酸钙在所述发酵培养基中的浓度具体可为2.5g/L，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度具体可为1g/L，所述甘油在所述发酵培养基中的浓度具体可为2.5g/L，所述吐温-80在所述发酵培养基中的浓度具体可为2g/L。

所述振荡培养具体可三角瓶中进行，所述发酵培养基在单个三角瓶中的装液量可为40-70ml（如40ml、50ml、60ml或70ml）。

所述振荡培养的条件具体可为：45℃、180r/min振荡培养5天。

所述方法还可包括如下步骤：完成所述振荡培养后，5000g离心20min，收集上清液。

所述接种的实现方法具体如下：将嗜热毁丝霉接种到PDA斜面上，45℃培养5d后挖块（具体大小可为0.5×1厘米）并进行所述接种。

以上任一所述方法制备得到的发酵物也属于本发明的保护范围。

本发明还保护所述发酵物在制备纤维素酶中的应用。