[发明专利]一种辣椒疫霉菌LAMP引物及其快速检测方法

权利要求书

1.一种辣椒疫霉菌的LAMP引物，其特征在于：所述LAMP引物序列如下：

F3：5’- TTGGCTTCGGCTGAACAG -3’ ；

B3：5’- GCGGGAAATTCTTGCCTGAA -3’；

FIP：5’- CGCAACAGCAAAGCCGATTCAA-ATGCTTTTCCTGCTGTGGC -3’；

BIP：5’- GGCTGTCGAGGGTCGATCCA-AGGTCCAATTGAGATGCGC -3’。

2.一种利用权利要求1所述引物的辣椒疫霉菌LAMP快速检测方法，其特征在于： LAMP反应体系25μl，其中F3与B3各0.25-0.30uM，FIP与BIP各1.6-1.8uM，20mM Tris-HCl，10mM (NH₄)₂SO₄，10mM KCl，8mM MgSO₄，0.1% Tween-20，0.8M Betaine，1.4 mM dNTPs，8U BstDNA 聚合酶大片段，10-50ng DNA模板，不足部分用无菌双蒸水补足；LAMP反应条件为在60-65℃温育30-90 min，80℃保温5-10min。

3.根据权利要求2所述的辣椒疫霉菌LAMP快速检测方法，其特征在于：在LAMP反应的扩增产物中加入1μl显色剂，所述显色剂为50μM Calcein-500μM MnCl₂，显色结果观察到绿色荧光判断为阳性，橙色判断为阴性；或取2μl扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，如出现梯形条带判断为阳性，没有出现则判断为阴性。

4.根据权利要求2所述的辣椒疫霉菌LAMP快速检测方法，其特征在于：所述的LAMP反应体系中， F3与B3优选为0.25uM， FIP与BIP优选为1.6uM，DNA模板优选为25ng；LAMP反应条件优选为在64℃温育60 min，80℃保温10min。