[发明专利]一种蝇蛆肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体地说，涉及一种由蝇蛆蛋白发酵生产抗氧化活性肽的方法。

背景技术

蝇蛆是家蝇(Musca domestica Linnaeus) 的幼虫，其体内（干物质）含蛋白质59-65 %，脂肪10-14 %，甲壳素8-10 %，此外，还含有多种维生素、微量元素等营养成分。蝇蛆蛋白具有抗菌、抗病毒和清除自由基的作用，但受传统观念的影响，市场对蝇蛆产品的接受度较低，因此蝇蛆粉通常作为动物饲料添加剂来使用。为了进一步有效利用蝇蛆蛋白，有研究人员将蝇蛆蛋白酶解，由此得到蝇蛆肽。蝇蛆肽具有良好的抗氧化、提高免疫功能的活性，其在医药、化妆品等行业有巨大的市场潜力。但现有的酶解制备方法工艺繁琐、转化率低、成本昂贵，不适宜工业化应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺简单、成本低廉、且转化率高的蝇蛆肽的制备方法。

为实现本发明目的，本发明所提供的蝇蛆肽的制备方法，包括以下步骤：

a、将可产生蛋白酶的安全微生物菌种接种到无菌培养基中，通气培养，得到微生物孢子或菌体；

b、将微生物孢子或菌体接种到以蝇蛆蛋白为唯一氮源的培养基中，发酵培养2~4天，去除菌丝球或菌体，获得蝇蛆肽溶液；

c、将蝇蛆肽溶液，低温干燥，得到蝇蛆肽。

本发明方法中的a步所述固体培养基在接种前要保持无菌状态，故可 0.1 MPa灭菌20 min，制成斜面备用。

所述可产生蛋白酶的安全微生物菌种为米曲霉（Aspergillus oryzae）、黑曲霉（Aspergillus  niger）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆菌（ Bacillus licheniformis）、放线菌（Actinomycete）中任意一种。

本发明方法中所述固体培养基可以是任何一种适合于上述微生物生长的营养介质，如察氏培养基、PDA培养基、麸皮豆粕培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基等。其中以麸皮豆粕培养基为优选。

麸皮豆粕培养基的配方以质量百分比计为：

豆粕30-40%， 麸皮10-_15_%，发酵豆粕浸提物0.1-1.0_%，水40-50_%。

配制方法为：称取一定质量的发酵豆粕浸提物，加入水中搅拌均匀，加入豆粕，室温浸泡至透，最后加入麸皮，拌匀，0.1 Mpa条件下灭菌20 min。

本发明方法所述以蝇蛆蛋白为唯一氮源的培养基，是在蝇蛆蛋白浸提液中加入碳水化合物（如蔗糖、葡萄糖、糖蜜或淀粉转化糖的任意一种，也可再加入一些其他微生物碳源），在20-40℃，10-400r/min摇瓶震荡通气，培养12-100小时。其制备方法是向新鲜蝇蛆中或干蝇蛆充分浸泡后加入pH6.5-8.0的缓冲液或生理盐水，于4-10℃下，匀浆、研磨、浸提10-20h，离心或过滤，除去固体不溶物，收集液体，调节至蛋白质浓度为20-30mg/mL，向其中加入碳水化合物，使碳水化合物的质量浓度为2-8%，优选5%，得到以蝇蛆蛋白为唯一氮源的培养基。

上述用于浸提蝇蛆蛋白的溶液可以是生理盐水或pH6.5-8.0的磷酸盐缓冲液中任意一种，优选0.2 mol /L pH6.9磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。

本发明方法中更为优选的以蝇蛆蛋白为唯一氮源的培养基配方为：以质量百分含量计，蝇蛆蛋白2-3%，葡萄糖或其他糖1-3%，磷酸氢二钠1.0 -2.0%，磷酸二氢钠0.5-1.5%，其余为水。

制备方法:称取一定质量的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，溶于水，加入新鲜蝇蛆或干蝇蛆浸泡透加入，匀浆，除去固形物，测定蛋白质浓度，使之在2-3%，加入1-3%葡萄糖或其他糖，搅拌均匀，0.1 Mpa灭菌20 min。

本发明方法更为优选的条件是：

a步骤所述通气培养，其温度最好为20-40℃，时间最好为30~48h。

本发明b步骤所述发酵培养，其条件最好为20-40℃下，10-400r/min摇瓶震荡，通气培养12-100h。

本发明采用微生物发酵法生产制备蝇蛆肽，其方法简单，制造成本低，转化率高（大于30%）。