[发明专利]连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法

权利要求书

1.一种连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：采用盆栽试验，选取未种植过花生的土壤，充分混匀后分与各盆，连续三年种植花生，连作三年的种植周期时间一致；每个种植周期内分别选取苗期、收获期收集花生根部土壤，并提取土壤基因组DNA，构建18S rRNA基因文库；最后对所构建的六组18S rRNA基因文库数据进行分析，得出演替规律。

2.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述盆栽试验中使用的盆是指底部带有透水孔，最大直径35-40cm，高度30-40cm的瓦盆。

3.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述未种植过花生的土壤，其成分为：28.5% 粘土，41% 有机土和 30.5% 沙。

4.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述连续三年种植花生，指每年花生收获后不再栽培其它作物。

5.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述连续三年种植花生，种植过程中采用四周通风的大棚遮挡雨水，用无菌水浇灌，整个种植过程不施加肥料。

6.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述每个种植周期分别选取苗期、收获期收集花生根部土壤，所指苗期为出苗20天，收获期则是花生饱满成熟时；所述收集花生根部土壤，是指每个时期任意选取三株花生为样本，每个样本在距离主根3-5cm、8-10cm和13-15cm的位置分别取样，每个距离分别重复取两次，所取样品充分混匀作为一个分析样本，用液氮快速冷冻后于-80℃保存备用。

7.根据权利要求1所述的连作花生土壤真核微生物群落演替的分析方法，其特征在于：所述构建18S rRNA基因文库，所用引物为：18S-F: 5'-ATTCCTAGTAAGCGCGAGTCATCAG-3'；18S-R: 5'-CAATGATCCTTCCGCAGGTTCAC-3' ；PCR扩增退火温度为55℃，扩增25个循环，25μL体系扩增6管，混合到一起作为后续纯化、建库的材料。