[发明专利]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

针对nuc基因：5`-GATACACCTGAAACAAAGCATCC-3`；

5`-GACCTTTGTCAAACTCGACTTC-3`；

针对mecA基因：5`-GAAGGTGTGCTTACAAGTGC-3`；

5`-TCAACTAACTATTGATGCTAAAGTTCAA-3`；

针对femA基因：5`-GCCACTATGAGTTAAAGCTTGC-3`；

5`-TCACTGGACCGCGATTTG-3`。

2.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测探针，其特征在于，所述的检测探针如下所示：

nuc基因的探针：5`-AGGTGTAGAGAAATATGGCCCTGAAGC-3`；

mecA基因的探针：5`-TTATGGCTCAGGTACTGCTATCCACCC-3`；

femA基因的探针：5`-ACGAGGTCATTGCAGCTTGCTTACT-3`；

探针的5`端标记有荧光报告基团，3`端标记有荧光淬灭基团，三探针的5`端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测探针，其特征在于，所述的荧光报告基团为TET、HEX或FAM，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。

4.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于，

所述的检测引物包括三对：

针对nuc基因：5`-GATACACCTGAAACAAAGCATCC-3`；

5`-GACCTTTGTCAAACTCGACTTC-3`；

针对mecA基因：5`-GAAGGTGTGCTTACAAGTGC-3`；

5`-TCAACTAACTATTGATGCTAAAGTTCAA-3`；

针对femA基因：5`-GCCACTATGAGTTAAAGCTTGC-3`；

5`-TCACTGGACCGCGATTTG-3`；

所述的检测探针包括：

nuc基因的探针：5`-AGGTGTAGAGAAATATGGCCCTGAAGC-3`；

mecA基因的探针：5`-TTATGGCTCAGGTACTGCTATCCACCC-3`；

femA基因的探针：5`-ACGAGGTCATTGCAGCTTGCTTACT-3`；

探针的5`端标记有荧光报告基团，3`端标记有荧光淬灭基团，三探针的5`端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。

5.一种非疾病的诊断和治疗目的的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对样品进行增菌培养，提取增菌液中菌体的基因组DNA作为模板；

（2）使用权利要求1所述的针对nuc基因、mecA基因和femA基因的检测引物和权利要求2所述的针对nuc基因、mecA基因和femA基因的检测探针，与实时荧光PCR扩增用的反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；

（3）将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据探针标记的荧光报告基团记录的荧光信号，读取并记录各检测样品的PCR扩增循环次数（Ct）；

（4）根据各样品的Ct值，按照建立的判断标准，判断样品中是否含有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。