[发明专利]柳枝稷木质素合成酶F5H2基因序列无效
| 申请号： | 201310323016.1 | 申请日： | 2013-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN103409441A | 公开（公告）日： | 2013-11-27 |
| 发明（设计）人： | 方程;周红丽;钱莉莉;叶凯 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N9/10;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 柳枝 木质素 合成 f5h2 基因 序列 | ||
1.一种柳枝稷木质素合成酶F5H2基因，其特征在于，所述基因是下面（a）或（b）定义的多核苷酸：
（a）如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的多核苷酸；
（b）在严格条件下与SEQ ID No.1所示核苷酸序列的DNA杂交的多核苷酸。
2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述基因表达得到的蛋白质的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。
3.一种权利要求1或2所述的基因的克隆方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1）柳枝稷总RNA的提取与cDNA第一链的合成；
2）根据已知核心片断PvF5H2，设计基因特异性引物：
P0：5'-CTCCGAGGGCTTCATGCCGTCTGG-3'；
P1：5'-CGCCACCGTCTCCGTCCCGCCAAACAT-3'；
P2：5'-GGGTTCTTCCCCCGCCTGATGTGCT-3'；
P3：5'-AACTCCTCCTGGTCCTCGCCGTCGC-3'；
P4：5'-GGACTCGTCGCGCACCGCCACCCAC-3'；
3）通过3’RACE，利用引物P0克隆出F5H2基因的3’末端序列；
4）通过5’RACE，利用引物P1、P2、P3、P4克隆出F5H2基因的5’末端序列；
5）利用DNAMAN软件拼接F5H2基因的5’末端序列和3’末端序列，得到F5H2基因的全长cDNA序列。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1）以柳枝稷的茎为材料，用植物RNA提取试剂盒提取总RNA，在利用RACE逆转录试剂盒分别合成5’RACE和3’RACE第一链cDNA。
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