[发明专利]一种酮还原酶突变体及其制备方法有效
| 申请号： | 201310319519.1 | 申请日： | 2013-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN104342410B | 公开（公告）日： | 2017-04-19 |
| 发明（设计）人： | 丁雪峰 | 申请（专利权）人： | 南京朗恩生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/62;C12R1/19 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙)32231 | 代理人： | 金辉 |
| 地址： | 210046 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 还原酶 突变体 及其 制备 方法 | ||
1.一种酮还原酶突变体，其源于酿酒酵母的野生型酮还原酶，能够使5-羟基-3-氧代己酸酯转化为对应的顺式3,5-二羟基己酸酯，其序列为SEQ ID NO.4。
2.一种多核苷酸，其编码如权利要求1所述的酮还原酶突变体。
3.如权利要求2所述的多核苷酸，其序列为SEQ ID NO.3。
4.一种重组质粒，其包括表达载体连接权利要求3所述的多核苷酸，所述载体序列为SEQ ID NO.5。
5.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于：所述细胞是大肠杆菌，为大肠杆菌W3110，DH1，和JM109中的一种。
7.一种如权利要求1所述酮还原酶突变体的制备方法，包括以下步骤：(a)构建表达酮还原酶突变体的基因工程菌，所述基因工程菌包括宿主细胞，表达载体以及酮还原酶突变体基因，所述宿主细胞为大肠杆菌W3110，DH1，和JM109中的一种；(b)筛选得到所述基因工程菌；(c)培养所述基因工程菌；(d)诱导表达所述基因工程菌；(e)收集和制备酮还原酶突变体。
8.根据权利要求7所述酮还原酶突变体的制备方法，其特征在于：所述步骤（c）为挑取含有目的表达载体的大肠杆菌单菌落接种于10ml 高压灭菌后的第一培养基中， 30℃，250rpm过夜培养；次日取1L三角瓶，按1：100的接种比例接入到100ml高压灭菌后的第二培养基中，于30℃中培养至菌体OD 5-6，立刻将三角瓶置于25℃摇床中，250rpm培养1h，加入IPTG至终浓度0.1mM，并于25℃，250rpm继续培养15h。
9.一种生产他汀类药物的关键的手性中间体的方法，包括在与权利要求1所述的酮还原酶突变体的存在下，使5-羟基-3-氧代己酸酯还原成对应的顺式3,5-二羟基己酸酯。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京朗恩生物科技有限公司，未经南京朗恩生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310319519.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
