[发明专利]一种葡萄糖基转移酶及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和生物制药技术领域领域，具体涉及一种新型葡萄糖基转移酶及其应用。

背景技术

通常，糖基化的化合物与相应的未糖基化的化合物相比，可能具有提高的水溶性，能够改善其生物利用率，增强药效，降低毒副作用。因此，天然化合物的糖基化修饰是热点研究主题。

Macrolactins是一系列24 元大环内酯类化合物，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗感染和抗衰老等生物学和药理学活性。最早，Fenical研究组于1989年从一株深海细菌中分离得到了Macrolactins A-F，研究表明，Macrolactin A能够抑制B1-F10鼠科动物的黑色素肿瘤细胞和哺乳动物单纯疱疹病毒，并且能够通过抑制HIV病毒的复制起到保护淋巴细胞的作用。这些年来，Macrolactins家族不断壮大，科学家们相继分离得到7-O-succinyl Macrolactin F及7-O-succinyl Macrolactin A，Macrolactins G-M（其中H为22元大环内酯，L为双环内酯），Macrolactin N，7-O-malonyl Macrolactin A，Macrolactin O-R，Macrolactin S和Macrolactin T。这些Macrolactins都具有良好的抗菌活性，其中Macrolactin N-R能够抑制金黄色葡萄球菌的肽脱甲酰酶，7-O-malonyl Macrolactin A对许多革兰氏阳性病原菌，如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和耐万古霉素的肠道球菌和洋葱伯克霍尔德菌的变种都表现出较好的抑制作用，Macrolactin B和T不仅能够抑制金黄色葡萄球菌，而且对植物病原真菌稻瘟霉和交链孢也有明显效果。

作为一类极具应用潜力的药物先导化合物，Macrolactins已经引起人们的极大关注，Macrolactins属于聚酮类化合物，其骨架结构Macrolactin A是由聚酮合酶(Polyketide synthases，PKSs)催化组装而成，然而其后修饰步骤的研究一直未见报导。发明人在研究Macrolactins的后修饰分子机制过程中，发现了对Macrolactins进行糖基化修饰的酶基因。通过对Macrolactins糖基化反应能够提高大环内酯类化合物的水溶性，进而可能改善其生物利用率，增强药效，降低毒副作用，为大环内酯类化合物的药物研制提供一个新的策略。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型葡萄糖基转移酶，能够对Macrolactins大环内酯类化合物进行糖基化修饰，从而弥补了现有技术的不足。

本发明一个方面提供一种葡萄糖基转移酶，包括有

(a)序列为SEQ ID NO:2的蛋白酶；

(b)通过对(a)中的蛋白酶缺失、取代、插入或添加一个或几个氨基酸，并具有(a)糖基转移酶活性的蛋白酶。

用于编码上述葡萄糖基转移酶的基因，其一种核苷酸序列为SEQ ID NO: 1。

本发明另一个方面提供一种重组载体，该重组载体携带有用于表达本发明的葡萄糖基转移酶的基因。

本发明还提供一种转化子，是将用于表达本发明的葡萄糖基转移酶的重组载体转化宿主细胞获的。

本发明的葡萄糖基转移酶的应用，是将糖供体的糖基结合到大环内酯类化合物上；

所述的糖供体试剂为(d)NDP-X，其中(d)NDP为(d)ADP，(d)TDP，(d)CDP，(d)GDP，(d)UDP任一种或几种，X代表单糖； X选自葡萄糖、葡糖醛酸、半乳糖、木糖、芹菜糖、阿洛糖、鼠李糖、阿拉伯糖或甘露糖；

所述的大环内酯类化合物为Macrolactins。

本发明的葡萄糖基转移酶 通过对Macrolactins糖基化反应能够提高大环内酯类化合物的水溶性，进而可能改善其生物利用率，增强药效，降低毒副作用，为大环内酯类化合物的药物研制提供一个新的策略。

附图说明

图1：本发明扩增的葡萄糖基转移酶mlnGT1的基因电泳图；

图2：本发明实施例3构建的表达载体构建验证电泳图； 

图3：纯化的糖基转移酶MlnGT1的SDS-PAGE分析电泳图；

图4.：糖基化产物的高效液相色谱(HPLC)谱图；

图5： Macrolactin A及糖基化产物的紫外吸收光谱图；

图6：糖基化产物的质谱(MS)谱图。

具体实施方式