[发明专利]二种食源性致病菌多重快速检测法及检测引物组和试剂盒

权利要求书

1. 一种沙门氏菌的快速检测引物组，其特征是：其外引物的上游引物的序列如SEQ No.1所示，其外引物的下游引物的序列如SEQ No.2所示；其内引物的上游引物的序列如SEQ No.3所示，其内引物的下游引物的序列如SEQ No.4所示。

2. 一种金黄色葡萄球菌的快速检测引物组，其特征是：其外引物的上游引物的序列如SEQ No.5所示，其外引物的下游引物的序列如SEQ No.6所示；其内引物的上游引物的序列如SEQ No.7所示，其内引物的下游引物的序列如SEQ No.8所示；其环引物的序列如SEQ No.9所示。

3. 一种使用检测引物组对食品中的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行多重快速检测的方法，其特征是：将沙门氏菌的检测引物组和金黄色葡萄球菌的检测引物组的检测引物组与待测样品的DNA进行LAMP反应，在反应结束后对反应液进行分析，以确定所述样品中是否含有沙门氏菌和/或金黄色葡萄球菌；在所述沙门氏菌的检测引物组中，外引物的上游引物的序列如SEQ No.1所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.2所示，内引物的上游引物的序列如SEQ No.3所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.4所示；在所述金黄色葡萄球菌的检测引物组中，外引物的上游引物的序列如SEQ No.5所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.6所示，内引物的上游引物的序列如SEQ No.7所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.8所示，环引物的序列如SEQ No.9所示。

4. 根据权利要求3所述的方法，其特征是：所述LAMP反应的反应温度为61.5-64.5℃，反应时间为60-80min。

5. 根据权利要求3或4所述方法，其特征是，所述“对反应液进行分析”的方法为：对所述反应液进行DNA熔解曲线分析，其中，熔解曲线的温度区间为63-95℃。

6. 根据权利要求3或4所述方法，其特征是：所述“对反应液进行分析”的方法为：对所述反应液进行阴阳性判断。

7. 根据权利要求3、4、5或6所述的方法，其特征是：在进行所述LAMP反应的反应液中，所述沙门氏菌的检测引物组中的外引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.03-0.05μM，内引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.45-0.55μM；所述金黄色葡萄球菌的检测引物组中的外引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.03-0.05μM，内引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.45-0.55μM，环引物的浓度为0.2-0.4μM；并且，进行所述LAMP反应的反应液中还包含有浓度为0.6-0.7M的甜菜碱、浓度为4.4-5.2mM的MgSO₄、10 %（体积）的10×BstDNA聚合酶缓冲液、5%（体积）的20×荧光染料、浓度为0.3-0.5U/μL的BstDNA聚合酶、浓度各为0.7-0.9mM的三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸。

8. 一种快速检测试剂盒，其特征在于：包括沙门氏菌的检测引物组、金黄色葡萄球菌的检测引物组、二种阳性对照品、BstDNA聚合酶、10×BstDNA聚合酶缓冲液、20×饱和荧光染料、MgSO₄溶液、甜菜碱溶液、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和无菌超纯水；所述沙门氏菌的检测引物组中的外引物的上游引物的序列如SEQ No.1所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.2所示，内引物的上游引物的序列如SEQ No.3所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.4所示；所述金黄色葡萄球菌的检测引物组中的外引物的上游引物的序列如SEQ No.5所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.6所示，内引物的上游引物的序列如SEQ No.7所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.8所示，环引物的序列如SEQ No.9所示；所述二种阳性对照品分别为沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的标准菌株的基因组DNA。

9. 一种快速检测试剂盒，其特征在于：包含2×LAMP预混液和二种阳性对照品，所述二种阳性对照品分别为沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的标准菌株的基因组DNA，在所述2×LAMP预混液中包含有沙门氏菌的检测引物组、金黄色葡萄球菌的检测引物组、浓度为1.2-1.4M的甜菜碱、浓度为0.6-1.0U/μL的BstDNA聚合酶、2×BstDNA聚合酶缓冲液、浓度为8.8-10.4mM的MgSO₄溶液、2×Eva green饱和荧光染料、无菌超纯水、以及浓度各为1.4-1.8 mM的三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸；所述沙门氏菌的检测引物组中的外引物的上游引物的序列如SEQ No.1所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.2所示的序列，内引物的上游引物的序列如SEQ No.3所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.4所示的序列；所述金黄色葡萄球菌的检测引物组中的外引物的上游引物的序列如SEQ No.5所示，外引物的下游引物的序列如SEQ No.6所示，内引物的上游引物的序列如SEQ No.7所示，内引物的下游引物的序列如SEQ No.8所示，环引物的序列如SEQ No.9所示；所述沙门氏菌的检测引物组中的外引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.06-0.10μM，内引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.9-1.1μM；所述金黄色葡萄球菌的检测引物组中的外引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.06-0.10 μM，内引物的上游引物和下游引物的浓度均为0.9-1.1μM，环引物的浓度均为0.4-0.8μM。