[发明专利]一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种生物制剂。

背景技术

狂犬病是一种由弹状病毒科(狂犬病毒属，lyssavirus) 的RNA 病毒感染引起的急性进行性脑炎。一般来说，狗是该病的主要宿主，但是其他哺乳动物如浣熊、臭鼬、蝙蝠和狐狸也是常见的宿主。该病毒从动物宿主向人的传播通常是通过咬伤或抓伤穿过皮肤而发生的。由于狂犬病在人类中几乎总是致命的，因此怀疑感染也必须用积极的接触后治疗方案来治疗。

对于严重暴露的人，世界卫生组织(World Health Organization，WHO) 建议采用狂犬病疫苗注射结合抗狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immune globulin，RIG) 的方法。目前使用的两类RIG 为人抗狂犬病毒免疫球蛋白(human rabies immune globulin，HRIG) 和马抗狂犬病毒免疫球蛋白(Equine rabies immune globulin，ERIG)。ERIG 由于对人体是异源蛋白，有时副反应比较严重，而HRIG价格昂贵，供应量有限并且有潜在的病原威胁，因此急需制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂。

人源狂犬病毒单克隆抗体的研制和噬菌体抗体库技术的产生为解决被动免疫制剂问题提供了新的思路，目前报道了多种特异性结合多种狂犬病毒分离株并且抑制病毒感染细胞的单克隆抗体。如WO 2005/118644中描述的抗狂犬病毒抗体、中国专利ZL200610012910.7中描述的狂犬病毒人源单抗NM57和中国专利ZL201010171543.1 中描述的RVFab8等。本文中的NC08即ZL201010171543.1所述RVFab8的全抗体。

对动物的保护性实验表明，利用针对同一靶点的单抗cocktail进行治疗具有可行性和优越性(Goudsmit J，et al.2006)。单抗NM57、NC08均为重组人源狂犬病毒中和性抗体，两株单抗分别中和狂犬病毒的不同表位，两种这样的抗体混合剂（cocktail）可更有效的用于狂犬病暴露后的预防。

与任何蛋白质一样，抗体的生物学活性例如其结合亲和性或者中和活性依赖于至少核心氨基酸序列的构象完整性，同时需要保护蛋白质的多个功能基团免于降解。化学和物理不稳定性均可导致抗体降解。因为抗体比传统的有机和无机药物更大且更复杂，因此这种抗体的制剂会出现特殊问题。抗体稳定性可以受到多种因素影响，包括离子强度、pH、温度、重复冷冻/解冻循环、抗体浓度和剪切力。抗体的活性可以由于物理不稳定性和化学不稳定性而丧失，物理不稳定性包括变性、聚集(可溶及不可溶聚集体形成)、沉淀与吸附；化学不稳定性包括外消旋化、β-消除或者二硫键交换、水解、脱酰胺作用和氧化等等。这些不稳定性均可能导致生物学活性的降低、毒性和/或免疫原性的增加，抗体副产物或者衍生物的形成。

虽然现有技术领域指出了可适用于生产特定抗体制剂的许多制剂辅料，但是不能预测为了克服特定抗体可能具有的特定的不稳定性问题而应该加入哪些辅料以及应该加入的量。此外，研究人员仍难以发现在特定制剂内保持特定抗体化学和生物学稳定性的最佳条件如抗体浓度、pH和贮存温度等。因此找寻用于配制单一的单克隆抗体制剂的合适辅料和最佳条件充满了挑战。显然，找寻同时使两种不同的单克隆抗体长期保持稳定的合适辅料和最佳条件更加困难。同时该制剂组成还应适于抗体产品预期的给药方式，便于使用。

对于由NM57及NC08组成的单抗cocktail来说，需要找寻一种制剂组成使NM57及NC08抗体在长期贮存情况下同时保持稳定，所述制剂还应适于特定的给药途径，使用方便。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量的实验，对可以用于NM57、NC08组合制剂的辅料的类型和用量进行了大量的筛选，得到了稳定的方便于临床使用的NM57、NC08抗体组合制剂，从而达到了本发明的目的。

本发明提供了一种狂犬病毒人源抗体组合制剂，其特征在于，所述组合制剂主要成分为：(i)0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57，其重链序列示于SEQ ID NO：1，其轻链序列示于SEQ ID NO：2；及(ii) 0.1～10mg/ml狂犬病毒人源抗体NC08，其重链序列示于SEQ ID NO：3，其轻链序列示于SEQ ID NO：4；及缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂，pH为5.5～6.5。