[发明专利]一种铜绿微囊藻的快速计数方法

权利要求书

1.一种铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，将含铜绿微囊藻的待测样品稀释一定倍数后，采用酶标仪测定藻液在波长680nm处的吸光度，根据建立的吸光度和细胞密度之间的校正曲线或回归方程，计算得到待测样品中的铜绿微囊藻的数量。

2.根据权利要求1所述的铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

1）校正曲线或回归方程的建立

配制一组含铜绿微囊藻的不同浓度的藻液，通过酶标仪测定不同浓度藻液在波长680nm处的吸光度A_i，同时用显微镜对每个浓度的藻液中铜绿微囊藻的细胞精确计数，得到细胞密度C_i，即单位体积藻液中铜绿微囊藻的细胞数；测定空白样品在波长680nm处的吸光度A₀，根据吸光度A_i-A₀和细胞密度C_i绘制校正曲线，或线性回归计算得到线性回归方程；

2）铜绿微囊藻计数

将含铜绿微囊藻的待测样品稀释一定倍数，使稀释后的藻液其细胞密度在校正曲线或回归方程的线性范围内，在与步骤1）相同的条件下，采用酶标仪测定稀释后藻液在波长680nm处的吸光度，根据校正曲线或回归方程计算得到待测样品中的铜绿微囊藻的个数。

3.根据权利要求2所述的铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，所述的步骤1）校正曲线或回归方程的建立按如下方法进行：

取1ml灭菌培养基培养的对数期的铜绿微囊藻，分别稀释2、5、8、10、20、50、100、1000倍，空白组加入灭菌的培养基，将稀释后不同浓度的藻液和空白组加入微孔板中，每组5～10个平行样；通过酶标仪测定每个浓度藻液在波长680nm处的吸光度，取平均值得到该浓度藻液的吸光度A_i，空白样品的吸光度A₀；同时用显微镜对每个浓度的细胞精确计数，每个样品重复5-8次，取平均值得到细胞密度C_i，在吸光度A_i-A₀和细胞密度C_i之间建立校正曲线或回归方程。

4.根据权利要求3所述的铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，所述的铜绿微囊藻的培养基为灭菌的BG-11。

5.根据权利要求2所述的铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，所述的步骤2）中含铜绿微囊藻的待测样品稀释后的藻液取8-10个平行样，加入微孔板中，采用酶标仪测定波长680nm处的吸光度，取平均值。

6.根据权利要求3或5所述的铜绿微囊藻的快速计数方法，其特征在于，所用微孔板为96孔板，每孔300μl样品。