[发明专利]硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法

权利要求书

1.硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是该方法包括如下工艺，A 患者病理标本来源、B 实验动物病理标本来源、C患者及实验动物脑组织标本的处理、D 标本β淀粉样蛋白1-42免疫组化染色、E 标本硫磺素T染色、F 光学/荧光显微镜病理检查。

2.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的A 患者病理标本来源，手术治疗患者的脑组织病理标本。

3.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的B 实验动物病理标本来源，12月龄阿尔茨海默病转基因模型动物，该动物麻醉处死后，灌注取脑。

4.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的C患者及实验动物脑组织标本的处理，针对患者及实验动物脑组织标本，取材时间为2h以内；用锋利的刀刃取材，组织的标本厚度不超过0.2cm，并及时放入质量浓度为10%中性缓冲甲醛液中固定；在石蜡切片时厚度应为3~5μm，并应尽量切薄。

5.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的D 标本β淀粉样蛋白1-42免疫组化染色，切片经二甲苯脱蜡、水化，将水化的组织切片置于立式染色缸(5片/缸)中，并向染色缸中加入抗原修复液，浓度为0.01M柠檬酸缓冲液，将立式染色缸置于高压锅内，该高压锅内蒸汽压力为1.6公斤/cm2，电磁炉加热（2000℃），以喷气记时2~3min，停止加热，自行冷却，减压后持续20min，将立式染色缸移出高压锅，流水冲洗将修复液洗尽，放入蒸馏水中，质量浓度为0.3%H₂O₂作用5~10min，将组织切片置于蒸馏水中，PBS液冲洗三次，每次3~5min，加入兔抗鼠β淀粉样蛋白1-42抗体1：600，切片放入湿盒内，该湿盒放在4℃冰箱内过夜，取出湿盒，PBS冲洗三次，每次3~5min；加HRP羊抗兔IgG 1：5000，将湿盒设在37℃内孵育30min，PBS冲洗三次，每次3~5min；DAB显色，镜下观察，控制显色时间，有阳性表达将终止显色，自来水洗；苏木素染色1~2min，自来水洗，质量浓度为1%盐酸乙醇分化，质量浓度为5%的碳酸氢钠或温水返蓝，脱水、透明、中性树胶封固。

6.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的E 标本硫磺素T染色，切片脱蜡、水化；组织切片入苏木素染液染色5min，自来水洗后入蒸馏水；将组织切片置入质量浓度为1%硫磺素T染液浸染5~10min，迅速蒸馏水洗，用中性甘油封固；避光保存；所述的苏木素染液是由苏木素2.5g，无水酒精25ml,硫酸铝钾，50g,蒸馏水500ml，黄色氧化汞1.25g，冰醋酸 20ml配制而成。

7.根据权利要求1所述的硫磺素T染色对β-淀粉样蛋白病理的分析方法，其特征是所述的F 光学/荧光显微镜病理检查，免疫组化染色切片在光学显微镜下以10×，40×放大倍数观察，计数阳性染色并拍照，硫磺素T染色切片在荧光显微镜下以10×，40×放大倍数经488nm光源激发，观察、计数阳性染色并拍照；阳性细胞计数：每个脑组织选4张连续切片，在10×光镜下随机选择不重叠的5个视野，计数阳性着色细胞，然后进行组间比较。