[发明专利]荚用菜豆抗炭疽病分子诊断试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于荚用菜豆抗炭疽病分子诊断的特异性引物，其特征在于该特异性引物1为：GGATCCATGCAAGGAACCTCCAAAGAC；特异性引物2为：ATTACTTGTGGAATTTTCCATGAGTCGACA。

2.一种用于荚用菜豆抗炭疽病分子诊断的试剂盒，其特征在于它是由特异引物1：GGATCCATGCAAGGAACCTCCAAAGAC；特异引物2：ATTACTTGTGGAATTTTCCATGAGTCGACA；dNTP、Taq聚合酶、PCR缓冲液、DNA模板、无菌去离子水、6×上样缓冲液、TBE电泳缓冲液及标准阳性Marker组成。

3.一种采用权利要求1所述的试剂盒在苗期对抗炭疽病菜豆种质资源进行筛查的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）一步法提取菜豆基因组DNA；

（2）基因组DNA的0.8%琼脂糖凝胶电泳检测；

（3）PCR扩增：在PCR扩增专用的薄壁离心管中加入：PCR缓冲溶液、dNTP、特异引物1、特异引物2、菜豆基因组DNA、Taq聚合酶、无菌水补至25微升，将装有上述液体的PCR专用薄壁离心管放入PCR扩增仪中，扩增条件为：90℃-95℃变性60-240秒，后进行90℃-95℃变性30-60秒，45℃-55℃退火40-60秒，70℃-74℃延伸120秒的扩增循环，循环数为30-45个，最后在70℃-74℃延伸480秒，扩增完成；

（4）PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测：配置1.2%的琼脂糖凝胶，在凝胶中加入0.5微克/毫升溴化乙锭；在5微升扩增产物及5微升标准阳性Marker中分别加入1微升6×上样缓冲液，混匀，用移液器将上述混合液分别加入浸没TBE电泳液的琼脂糖凝胶的点样孔中，60-150V恒电压，电泳1800-4800秒后停止电泳，凝胶直接在波长265nm紫外灯下或在凝胶成像仪器上进行观察；

（5）依照标准阳性Marker带在凝胶上的迁移位置和PCR产物的迁移位置判断未知菜豆抗、感炭疽病情况。

4.权利要求1所述用于荚用菜豆抗炭疽病分子诊断的特异性引物在制备苗期对抗炭疽病菜豆种质资源筛查的试剂盒方面的应用。