[发明专利]邻苯二甲酸二丁酯快速检测试剂盒的制备及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，更具体地讲，涉及一种检测邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate，DBP)的酶联免疫分析测定试剂盒及其制备、使用方法。

背景技术

邻苯二甲酸酯类(PAEs)是增塑剂的主体，广泛应用于农膜、黏合剂、服装、农药、肥料、油漆、化妆品、儿童玩具等行业，具有三致(致癌、致畸、致突)作用，属于环境内分泌干扰物，是环境中常见的痕量有机污染物之一。最常使用的为邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二辛酯(DOP)、邻苯二甲酸二异辛酯(DHEP)和邻苯二甲酸二甲酯(DMP)等。这几种化合物已被美国国家环保局(USEPA)列为“优先监控污染物”。中国已将DMP、DBP、DOP列入优先控制污染物黑名单。《国家饮用水标准》(GB5749-2006)要求DOP＜0.008mg/L，DBP＜0.003mg/L，DEP＜0.3mg/L。《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》(GB9685-2008)规定食品、食品添加剂中的DOP＜1.5mg/kg、DINP＜9.0mg/kg、DBP＜0.3mg/kg。由此可见，急需研制出方便、快捷、检出限低的DBP测试方法已迫在眉睫。

目前最引起广泛关注的是DBP的生殖毒性和发育毒性(包括胚胎毒性)。美国NTP的一系列研究表明，DBP可致雄性啮齿类动物睾丸标志酶活性下降、重量减轻、曲细精管变萎缩、生殖道畸形等。2006年11月起，DBP被列入California Proposition65(1986)可疑致畸物清单中，是一种可疑的内分泌干扰素，曾用在指甲油中。所有主要生产商都从2006年秋季开始减少这种物质在指甲油中的使用。DBP在儿童玩具和儿童保育用品中被永久禁止使用超过1000ppm的浓度，在《2008年消费品安全改善法》(Consumer Product Safety Improvement Act of 2008，CPSIA)中section108已有规定。DBP已广泛渗透到人类生活的各个领域，所带来的危害逐步被认可，因此DBP测试方法及测试技术的研究也在逐步的深入。

DBP与其他邻苯二甲酸酯一样，能引起中枢神经和周围神经系统的功能性变化，进一步引起组织上的改变，有趋肝性，可引起轻度致敏作用。对人：最敏感的人可嗅到的阈浓度为0.00026mg/L，对眼的光感反射作用的阈浓度为0.00016mg/L，对脑生物电活动的阈浓度为0.00011～0.00012mg/L。对皮肤和眼睛的作用：可经完整皮肤吸收少量；皮肤及眼粘膜一次接触后，并不引起刺激作用，而反复接触则可见到严重的刺激。某些实验资料表明，它可引起烃度的致敏作用。对动物：小白鼠吸入2小时气雾剂的LD50＝25mg/L。中毒期间可见对眼粘膜及上呼吸道粘膜的强烈刺激，呼吸困难，共济失调，后肢麻痹；部分动物呈现浅表的麻醉，阵挛性惊厥。DBP还具有中等程度的蓄积作用和轻度刺激作用。因此建立简便、快捷的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)检测方法显得尤为重要。

近年来国内外对食品塑料包装材料中PAEs分析比较重视，研究较多，主要是提高检测效率。其中前处理技术主要有净化体积阻滞色谱(SEC)、凝胶色谱(GPC)、超临界萃取(SFE)、固相萃取(SPE)、加速容积萃取(ASE)；测试技术主要采用液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱发(LC-MS)、气相色谱发(GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)等，但检测费用昂贵，需要专业人员操作，样品前处理繁琐，难以进行批量处理，很难满足酒水、饮料行业快速诊断的需求。为此，研发灵敏度高、检测线低、操作简便的快速诊断试剂盒显得极为迫切。

对城市污水和工业废水中邻苯二甲酸酯类物质的测定已有不少报道。然而，这些内分泌干扰物在饮用水中的浓度通常在ng/L甚至更低，通常的气相色谱和液相色谱方法由于灵敏度有限难于检测。常用的方法是经过溶剂萃取等富集手段后，采用GC/MS或GC/MS-MS测定。这种方法用于测定极性较强的酚类和高沸点的组分时，往往需要进行烦琐的前处理过程，难于适应快速分析的需要。随着生物技术的不断发展，免疫分析越来越受青睐，但国内外有关免疫分析检测邻苯二甲酸酯类的较少。免疫分析具有特异性强，灵敏度高，方便快捷，分析容量大检测成本低，安全可靠等优点可满足简单、快速、灵敏检测的需要。因此，开发了快速检测邻苯二甲酸二丁酯试剂盒。本试剂盒的灵敏度可达0.09ppm，在低浓度的饮用水、饮料、酒类的检测中很占优势。

发明内容