[发明专利]邻苯二甲酸二丁酯快速检测试剂盒的制备及检测方法

权利要求书

1.一种检测邻苯二甲酸二丁酯(DBP)酶联免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括邻苯二甲酸二丁酯(DBP)标准溶液，固相载体，酶标记物，DBP抗试剂，底物显色液，包被液，酶稀释工作液，终止液及浓缩洗涤液。 

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为微孔板，所述微孔板由邻苯二甲酸二丁酯(DBP)抗原包被，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗，所述DBP抗试剂为DBP抗体，所述底物显色液含四甲基联苯胺(TMB)，所述包被液为碳酸盐缓冲液，所述酶稀释工作液为含Tween20的PBS溶液，所述终止液含浓硫酸，所述浓缩洗涤液为磷酸盐缓冲液。 

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述抗原为邻苯二甲酸二丁酯的高亲和力的完全抗原，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的DBP抗抗体，DBP酶标物的浓度：250ng/mL，DBP抗体浓度：200ng/ml，样品稀释液：PH9.6。 

4.根据权利要求1～3任一项所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有： 

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5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有： 

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6.一种检测邻苯二甲酸二丁酯(DBP)试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 

A.制备固相载体：将0.05mol/L的包被液与邻苯二甲酸二丁酯(DBP)完全抗原以适当比例混合，将混合液负载与载体上，用洗涤液清洗酶标板，拍干后用酶标板保护液封闭保护上述洗涤后的载体。 

B.制备辣根过氧化物标记的羊抗鼠二抗：采用棋盘滴定法选择最佳的酶标记物的工作浓度。酶标二抗溶于酶稀释液中以制备二抗工作液。 

C.制备DBP抗试剂：用一抗稀释液配制200ng/ml的一抗溶液。 

D.制备底物显色液：以DMSO为稀释液配制成较低浓度的TMB溶液即成。 

E.制备浓缩洗涤液： 

所述浓缩洗涤液含有： 

F.制备邻苯二甲酸二丁酯(DBP)标准溶液：用含10％甲醇的超纯水稀释成0ppm、0.09ppm、0.27ppm、0.81ppm、2.43ppm、7.29ppm共六个浓度的DBP标准品。 

G.制备终止液： 

终止液含有： 

硫酸    15％(质量) 

H.制备样品提取液： 

所述样品提取液含有： 

正己烷    色谱纯 

甲醇      35％。 

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩液含有： 

。

8.一种检测邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的方法，所述方法包括以下步骤： 

A.样品前处理： 

a.瓶装或桶装饮用水 

加入浓缩样品稀释液使其样品稀释成1.5倍即为待测液。 

b.瓶装或罐装饮料、酒 

取5ml样品加入2ml色谱纯正己烷混匀后静止，取上清液1ml挥干，用1ml的35％的甲醇重溶即稀释成0.4倍的待测液。 

B.使用前述试剂盒及微孔板酶标分析仪检测定量样品液邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的含量。 

优选地，所述步骤B包括： 

a.加标准品或样品：加标准品或样品40～60μL到对应微孔板中，加入DBP抗试剂40～60μL/孔，再加入酶标物40～60μL/孔，混匀，用盖板膜盖板后室温或37℃反应30～60min。 

b.洗板：揭开膜后，将孔内液体甩干，用洗涤工作液200～400μL/孔，充分洗涤数次，每隔30s，用吸水纸拍干。 

c.显色：加入显色液50～100μL/孔，用盖板膜盖板后室温或37℃反应10～15min。 

d.测定：加入终止液40～60μL/孔，混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔OD值。 

e.结果判定：在微孔板酶标仪上测定OD值，与根据标准品OD值的标准曲线对比，确定样品中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的含量。 

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤B中反应温度为37℃，所述DBP标准品或样品的加入体积50μL/孔，所述DBP抗试剂的加入体积为50μL/孔，所述酶标物加入体积为50μL/孔，所述显色液的加入体积为100μL/孔，所述洗涤工作液加入体积为300μL/孔，所述终止液的加入体积为50μL/孔，所述反应时间40min，所述显色时间10min。