[发明专利]香豆素衍生物及其制备方法以及弹性蛋白酶活性检测方法和检测试剂盒

权利要求书

1.一种香豆素衍生物，该香豆素衍生物如式（1）所示，其中，R₁为五氟乙基和七氟丙基中的一种，R₂为三氟甲基、甲基、氰基、吡啶环和苯并噻唑环中的一种；

式（1）。

2.权利要求1所述的香豆素衍生物的制备方法，其特征在于，该方法包括在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式（2）所示的化合物与酰氯或酸酐接触；

式（2）

其中，所述酰氯选自五氟丙酰氯，七氟丁酰氯中的一种，所述酸酐选自五氟丙酸酐、七氟丁酸酐中的一种。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，相对于1毫摩尔的式（2）所示结构化合物，所述酰氯或酸酐的用量为1-3毫摩尔，所述缚酸剂的用量为1-3毫摩尔，所述有机溶剂的用量为10-20毫升。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其中，所述亲核反应条件包括：温度为零下5℃至30℃，时间为10-120min。

5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其中，所述缚酸剂为三乙胺、二乙胺、二异丙基胺、吡啶、N,N-二甲氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种，所述有机溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿、四氯化碳、乙腈、丙酮、乙二醇二甲醚、N,N-二甲基甲酰胺和1,2-二氯乙烷中的至少一种。

6.权利要求1所述的香豆素衍生物在检测弹性蛋白酶的活性中的应用。

7.一种弹性蛋白酶的活性的检测方法，其特征在于，该方法包括：

将待测样品与权利要求1中所述的香豆素衍生物接触，得到接触后的物料；

检测接触后的物料在激发光下发出的荧光强度的增加值，所述荧光强度的增加值指示了待测样品中弹性蛋白酶的活性；所述激发光的波长为340-430nm，所述荧光的发射波长为450-520nm。

8.权利要求7所述的检测方法，其中，相对于1μM的弹性蛋白酶，所述香豆素衍生物的用量为1-100μM。

9.权利要求7或8所述的检测方法，其中，接触的条件包括：温度为25-37℃，pH值为6-8，时间为5-30min。

10.一种弹性蛋白酶的活性的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：权利要求1所述的香豆素衍生物、弹性蛋白酶标准品以及反应缓冲液。