[发明专利]从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物分离领域，具体涉及采用常用的提取方法和柱层析分离技术从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离，利用1H NMR、13C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。 

背景技术

对叶大戟(Euphorbia sororia A.)为大戟科大戟属植物，以全草入药和果实入药，是一年生草本，维吾尔名为“苏孜阿甫”。主要分布于中亚和我国新疆和田等地区。功能主治为利水消肿、降压清脑、泻下杂虫，用于大便秘结、尿频、高血压头痛、肝硬化、水肿以及疥疮肿痛。 

据文献报道，对叶大戟中含有萜类、黄酮类、生物碱类、脂肪油、甾醇类、酯类等多种生物活性的成分。 

本发明中，我们采用常用的提取方法和柱层析分离技术对“对叶大戟”化学成分进行了提取与分离，利用¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。该成分为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。 

对叶大戟中黄酮类化合物的生理活性作用主要体现在具有生物抗氧化性、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂、降血压、降低血糖作用、抗肿瘤作用等。新疆具有丰富的药用植物资源，为了有效、合理地利用药用植物资源，对天然药物有效成分的提取分离及分析研究十分必要。 

发明内容

 本发明的目的是提供一种从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法。 

本发明的目的是通过下述方案实现：一种从对叶大戟中山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法，其特征在于包含以下步骤： 

 1、提取与分离

将10 kg对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。其残渣用70 % 乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并，加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，对萃取物进行减压浓缩，得到四个部分的浸膏物。

用大孔树脂分离：将正丁醇萃取部分加入至大孔树脂中吸附，先用少量水洗，然后依次用20 % 、50 % 、80 % 乙醇进行洗脱，分别收集下柱洗脱液，浓缩，薄层色谱检测，合并相同部分，在流动相为50 % 的流分中得到了粗提取物。 

用硅胶吸附树脂分离：将上述粗提取物以适量硅胶拌样，上硅胶柱，进行硅胶色谱层析分离，分别用氯仿—甲醇 ( 20:1, 10:1, 6:1, 2:1, ) 为流动相进行梯度洗脱，薄层色谱检测，合并相同部分，在流动相氯仿—甲醇为 2:1 的流分中得到了粗提取物。 

用葡萄糖凝胶（Sephadex HL-20）纯化：将上述粗提取物上凝胶柱，进行凝胶色谱层析分离，用氯仿—甲醇 2:1 为流动体系进行梯度洗脱，薄层色谱检测，合并相同部分，流分中得到了纯度很高的黄酮类成分，即山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。 

附图说明

图1为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的¹H- NMR谱图。 

图2为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的¹³C-NMR谱图。 

图3为山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的MS谱图。 

具体实施方式

实施方式1 

将10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。其残渣用70 %乙醇超声波再次提取三次（每次2h），过滤，合并滤液，提取溶液浓缩回收得水提浸膏物，将95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并，加水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、葡萄糖凝胶柱层析等分离方法对正丁醇萃取部分进行分离， 得到山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷,测定其含量为 98.5%。

实施方式2: