[发明专利]一种裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备的方法

权利要求书

1.一种裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，该方法包括以下步骤：

将pelB信号肽编码序列与金黄色葡萄球菌核酸酶基因序列连接，得第一组合序列，其中所述pelB信号肽编码序列在所述金黄色葡萄球菌核酸酶基因序列上游；

将所述第一组合序列与卡那霉素抗性基因序列连接，得到第二组合序列，其中所述第一组合序列在所述卡那霉素抗性基因序列上游；

用所述第二组合序列替换大肠杆菌JM109的ptsG基因序列，获得ptsG基因缺失的大肠杆菌JM109；

将所述ptsG基因缺失的大肠杆菌JM109的第二组合序列中的卡那霉素抗性基因敲除。

2.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述pelB信号肽编码序列为SEQ ID NO:1，所述金黄色葡萄球菌核酸酶基因序列为SEQ ID NO:2，所述卡那霉素抗性基因序列为SEQ ID NO:5。

3.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌核酸酶基因利用序列为SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4的引物对克隆获得。

4.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述卡那霉素抗性基因序列以质粒pKD13为模板，利用序列为SEQ IDNO:8和SEQ ID NO:9的引物对克隆获得。

5.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述将pelB信号肽编码序列与金黄色葡萄球菌核酸酶基因序列连接通过将金黄色葡萄球菌核酸酶基因序列插入至载体pET获得。

6.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述卡那霉素抗性基因序列以质粒pKD13为模板克隆获得，且其5’端和3’端均包含FRT位点。

7.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述用第二组合序列替换大肠杆菌JM109的ptsG基因序列的步骤包括将质粒pKOBEG或质粒pKD46转化至大肠杆菌JM109的操作。

8.如权利要求7所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述用第二组合序列替换大肠杆菌JM109的ptsG基因序列的步骤还包括将所述质粒pKOBEG或质粒pKD46去除的操作。

9.如权利要求1所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述将卡那霉素抗性基因敲除的步骤包括将质粒pCP20转化至所述ptsG基因缺失的大肠杆菌JM109的操作。

10.如权利要求9所述的裂解时自动降解核酸的大肠杆菌制备方法，其特征在于，所述将卡那霉素抗性基因敲除的步骤还包括将所述质粒pCP20去除的操作。