[发明专利]可逆终端及其合成和在DNA合成测序中的用途

权利要求书

1.一种可逆终端，其结构式如式(I)所示：

其中R₁为荧光素，R₂为连接单元。

2.如权利要求1所述的可逆终端，其特征在于，所述可逆终端的结构式如式(II)所示：

3.如权利要求2所述的可逆终端，其特征在于，所述可逆终端是通过如下步骤合成的：

A、化合物F₂的合成：在冰水浴搅拌条件下，摩尔比为1.0∶(1.2～2)的丙炔胺与三氟乙酸甲酯反应，得化合物F₂

B、化合物F₃的合成：在CuI、Pd(PPh₃)₄和TEA存在的条件下，化合物F₂和F₁反应，得化合物F₃所述F₁、F₂、CuI、Pd(PPh₃)₄和TEA的摩尔比为1∶(2～3)∶0.072∶0.025∶(1.5～2)；

C、化合物dUTP-NH₂的合成：化合物F₃与三正丁胺焦磷酸盐、2-氯-4H-1，3，2-苯并二氧磷-4-酮在三乙胺和碘存在下反应，反应产物去保护，得化合物dUTP-NH₂所述三正丁胺焦磷酸盐、2-氯-4H-1，3，2-苯并二氧磷-4-酮和F₃的摩尔比为2∶2∶1；

D、化合物dUTP-SPDP的合成：在TEA存在的条件下，化合物dUTP-NH₂在碳酸钠碳酸氢钠缓冲液中，与以无水乙腈为溶剂的SPDP反应，得化合物dUTP-SPDP所述的dUTP-NH₂和SPDP的摩尔比为1∶(1.5～3)；

E、化合物RDM-SH的合成：在DTT存在的条件下，半胱胺在碳酸钠碳酸氢钠缓冲液中与化合物TAMRA(5/6)避光反应，得化合物RDM-SH所述TAMRA(5/6)、半胱胺和DTT的摩尔比为1∶(10～50)∶(40～70)；

F、化合物dUTP-T的合成：以Na₃PO₄-EDTA缓冲液和乙腈为溶剂，化合物dUTP-SPDP与RDM-SH反应，得化合物dUTP-T；所述RDM-SH、dUTP-SPDP的摩尔比为1∶(1～2)；所述化合物dUTP-T即具有式(II)所示结式的可逆终端。