[发明专利]基因打靶载体及其利用方法

权利要求书

1.基因打靶载体，其具有与目标部位的5’上游区域相同的DNA和与目标部位的3’下游区域相同的DNA夹阳性选择标志物的结构，其中上述阳性选择标志物的5’上游附加有剪接受体部位和使双顺反子性表达成为可能的DNA序列，再者，上述与目标部位的5’上游区域相同的DNA的5’上游也附加有剪接受体部位。

2.权利要求1所述的载体，其中阳性选择标志物附加有多聚A序列，但不附加有启动子。

3.权利要求1或2所述的载体，其中与目标部位的5’上游区域相同的DNA的5’上游上附加的剪接受体部位的3’下游附加有多聚A序列。

4.权利要求3所述的载体，其中与目标部位的5’上游区域相同的DNA的5’上游上附加的剪接受体部位和其3’下游上附加的多聚A序列之间导入有阴性选择标志物。

5.权利要求1～4之任一项所述的载体，其中再导入有线性化部位。

6.制作基因敲除细胞的方法，其包括使用权利要求1～5之任一项所述的基因打靶载体，向细胞导入基因变异。