[发明专利]嵌合的双链核酸

说明书

本发明公开了借助反义作用抑制靶基因表达的双链核酸复合物，和使用该双链核酸复合物的方法。一种用于减少细胞中转录产物水平的方法包括使组合物与细胞接触，所述组合物包含双链核酸复合物，所述双链核酸复合物包含与第二核酸链复性的第一核酸链，其中第一核酸链(i)包含核苷酸和任选地核苷酸类似物，并且第一核酸链中核苷酸和核苷酸类似物的总数是8至100，(ii)包含当第一核酸链与转录产物杂交时由RNA酶H识别的至少4个连续核苷酸，并且(iii)第一核酸链与转录产物杂交；和第二核酸链包含核苷酸和任选地核苷酸类似物。

技术领域

本申请涉及具有借助反义作用抑制靶基因表达的活性的双链核酸，并且更具体地，涉及包含反义核酸和与所述反义核酸互补的核酸的双链核酸，所述反义核酸与靶基因的转录产物互补并含有包含4个或更多个连续碱基的区域。

背景技术

近年来，寡核苷酸已经成为正在开发的称作核酸药物的药物产品中的目的主题，并且特别地，从靶基因的高度选择性和低毒性的观点看，利用反义方法开发核酸药物正在活跃进行中。反义方法是通过引入与靶基因的mRNA(有义链)的部分序列互补的寡核苷酸(反义寡核苷酸(ASO))至细胞中，选择性抑制靶基因编码的蛋白质表达的方法。

如图1(上半部分)中所示，将包含RNA的寡核苷酸作为ASO引入细胞时，ASO与靶基因的转录产物(mRNA)结合，并且形成部分的双链。已知这种双链发挥覆盖物的作用以防止核糖体翻译，并且因此抑制靶基因编码的蛋白质的表达。

在另一方面，将包含DNA的寡核苷酸作为ASO引入细胞时，形成部分的DNA-RNA异双链体。由于RNA酶H识别这种结构，靶基因的mRNA因而分解，抑制靶基因编码的蛋白质的表达。(图1，下半部分)。另外，还已经发现在许多情况下，与使用RNA时相比，基因表达抑制效应在使用DNA作为ASO(RNA酶H依赖性途径)时更高。

在利用寡核苷酸作为核酸药物的情况下，已经在考虑增强对靶RNA的结合亲和力、体内稳定性等时开发多种核酸类似物如锁核酸(LNA)(注册商标)、其他桥连的核酸等。

如图2中所示，由于天然核酸(RNA或DNA)的糖部分具有含4个碳原子和1个氧原子的五元环，所以糖部分具有两种构象：N型和S型。已知这些构象从一种形式转变成另一种形式，并且因而核酸的螺旋结构也采取不同形式：A型和B型。由于充当前述ASO的靶的mRNA采取A型螺旋结构，糖部分主要处于N型，因此从增加对RNA的亲和力的观点看，ASO的糖部分采取N型是重要的。已经在这种概念下开发的产品是修饰的核酸，如LNA(2'-O,4'-C-亚甲基桥连的核酸(2',4'-BNA))。例如，在LNA中，由于2'-位置处的氧和4'-位置处的碳由亚甲基桥连，所以构象固定成N型，并且不存在构象之间的波动。因此，与采用常规天然核酸合成的寡核苷酸相比，通过掺入几个LNA单元所合成的寡核苷酸具有针对RNA的非常高的亲和力和非常高的序列特异性，并且还显示出优异的耐热性和核酸酶抗性(见PTL1)。由于其他人工核酸也具有这类特征，更多注意力投向与利用反义方法等有关的人工核酸(见PTL1至7)。

另外，将寡核苷酸应用至药物时，重要的是相关寡核苷酸可以以高特异性和高效率递送至靶部位。此外，作为用于递送寡核苷酸的方法，已经开发了一种利用脂质如胆固醇和维生素E的方法(NPL1和2)、一种利用受体特异性肽如RVG-9R的方法(NPL3)和一种利用对靶部位特异的抗体的方法(NPL4)。

引文目录

[专利文献]

[PTL1]JP10-304889A

[PTL2]WO2005/021570

[PTL3]JP10-195098A

[PTL4]JP2002-521310W

[PTL5]WO2007/143315

[PTL6]WO2008/043753